幽门螺杆菌东亚型菌株GZ7/cagA⁺和GZ7/ΔcagA源外膜囊泡的蛋白组学比较

摘要

目的 通过分离、鉴定和比较细胞毒素相关基因A蛋白（cagA）、阳性幽门螺杆菌（H.pylori）、东亚型菌株GZ7/cagA⁺及其cagA敲除菌株GZ7/ΔcagA来源的外膜囊泡（OMVs）中的差异表达蛋白（DEPs）,分析cagA基因对OMVs中蛋白表达的影响。方法 采用超速离心法分别提取GZ7/ΔcagA和GZ7/cagA⁺的OMVs,通过透射电镜和纳米颗粒追踪技术鉴定其形态和粒径，使用Western blot技术验证两组OMVs中cagA蛋白的表达，分析OMVs的蛋白质组学；对蛋白组学数据进行质控分析和主成分分析鉴定后，以上调蛋白倍数变化（FC）>2.0、下调蛋白FC<0.5,FDR≤0.05为筛选条件筛选DEPs,利用OmicsBean在线工具、Gene Ontology和KOBAS对DEPs进行生物信息学分析；采用免疫荧光鉴定OMVs细胞在细胞中的定位，实时无标记细胞分析仪检测细胞活性。结果 通过电镜和粒径证实成功分离纯化了OMVs;蛋白质组分析发现，GZ7/cagA⁺-OMVs组与GZ7/ΔcagA-OMVs组比较有79个DEPs,其中38个蛋白下调、41个蛋白上调；生物信息学分析显示，DEPs主要与丙酮酸代谢、丙酸代谢、糖酵解/糖异生及柠檬酸循环等代谢途径有关；免疫荧光和实时无标记细胞分析证实H.pylori来源的OMVs能进入细胞并定位在线粒体并抑制细胞增殖。结论 cagA能影响H.pylori分泌的OMVs中蛋白质的成分，DEPs可能促进cagA⁺H.pylori在胃黏膜上的定植及致病性。

关键词

幽门螺杆菌 / 细胞毒素相关基因A蛋白 / 胃癌 / 蛋白组 / 差异表达蛋白 / 线粒体