小檗碱通过SIRT2介导NF-κB乙酰化对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

摘要

目的 探讨小檗碱（BBR）对三阴性乳腺癌（TNBC）MDA-MB-231细胞凋亡的影响及机制。方法 采用细胞增殖毒性实验（CCK-8）检测BBR对MDA-MB-231细胞增殖活性的影响、计算IC₅₀,并将0、1/2 IC₅₀、IC₅₀作为后续实验浓度；采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测BBR作用后MDA-MB-231细胞中促凋亡蛋白BAX、B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）的mRNA表达水平，Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2（SIRT2）蛋白、核转录因子NF-κB P65、乙酰化P65、BAX、BCL-2的表达水平；线粒体膜电位实验检测线粒体膜电位变化。结果 CCK-8检测结果发现BBR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖活性（P<0.05）,24 h的IC₅₀为（92.282±12.297）μmol/L,48 h的IC₅₀为（54.544±6.092）μmol/L;RT-PCR检测结果显示BBR作用后，MDA-MB-231细胞中BAX mRNA表达水平增加（P<0.05）,BCL-2 mRNA水平下降（P<0.05）;Western blot结果显示BBR降低SIRT2蛋白表达水平（P<0.05）、升高NF-κB（P65）蛋白表达（P<0.05）,作为SIRT2底物的P65乙酰化修饰水平上升（P<0.05）、BAX增加（P<0.05）、BCL-2降低（P<0.05）;线粒体膜电位随BBR浓度的增加而增加（P<0.05）。结论 BBR能够抑制MDA-MB-231细胞的生长，其机制可能是BBR具有潜在的赖氨酸去乙酰转移酶（KDAC）抑制剂作用，抑制SIRT2的表达，改变P65乙酰化水平，诱导MDA-MB-231细胞线粒体途径相关的凋亡发生。

关键词

小檗碱 / SIRT2 / NF-κB / 三阴性乳腺癌 / 细胞凋亡