沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖和药物敏感性的影响

摘要

目的 探讨沉默髓鞘和淋巴细胞蛋白2(MAL2)基因对乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖和药物敏感性的影响，同时研究乳腺癌细胞对阿霉素(DOX))和顺铂(DDP)的耐药机制。方法 利用数据库分析MAL2基因在正常组织、癌旁组织和乳腺癌组织中的表达及与预后的相关性；采用蛋白印迹(Western blot)法检测MAL2在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7及MDA-MB-468细胞中的蛋白表达；利用转染干扰序列沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达，根据序列不同分为对照组(siRNA-NC组)和实验组(siRNA-MAL2-1组、siRNA-MAL2-2组及siRNA-MAL2-3组);选取沉默效果最好的实验组(siRNA-MAL2-3组)序列进行慢病毒构建及实验，沉默乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中MAL2的表达，分为sh-NC组(序列同siRNA-NC组)和sh-MAL2组(序列同siRNA-MAL2-3组),采用Western blot法检测MAL2的蛋白表达，CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力；CCK8法、流式细胞术及Western blot检测沉默MAL2基因的表达后乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性；Western blot检测p-AKT/m-TOR通路相关蛋白[磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)]的表达情况。结果 生物信息学分析显示MAL2在乳腺癌组织中高表达、且其高表达和患者预后不良相关(P<0.05),MAL2在乳腺癌细胞系中高表达(P<0.01);与siRNA-NC组相比，siRNA-MAL2-3组的MAL2蛋白沉默效果较好(P<0.01);感染慢病毒实验结果表明，与sh-NC组比较，sh-MAL2组MAL2表达被抑制(P<0.05);与sh-NC组相比，sh-MAL2组细胞增殖能力无变化(P>0.05)、对DOX和DDP的敏感性增强(P<0.05)、p-AKT和p-mTOR蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默MAL2对乳腺癌细胞增殖能力没有影响，但可促进乳腺癌细胞对DOX和DDP的敏感性，其机制可能与AKT/m-TOR通路相关蛋白被抑制有关。

关键词

乳腺肿瘤 / 髓鞘和淋巴细胞蛋白2 / 细胞增殖 / 阿霉素 / 顺铂 / 蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白