吡非尼酮对肝纤维化大鼠肠黏膜屏障的保护作用及机制

摘要

目的 建立肝纤维化大鼠模型，观察吡非尼酮（PFD）对肝纤维化大鼠肠道黏膜屏障的影响及可能机制。方法 30只大鼠均分为正常对照组、四氯化碳（CCL₄）组及CCL₄+PFD组，除正常对照组腹腔注射等体积生理盐水外、其余大鼠使用50%CCL₄橄榄油溶液按0.1 mL/100 g于下腹部腹腔注射建立肝纤维化模型，模型建立成功后CCL₄+PFD组按200 mg/kg给予PFD溶液灌胃，其余大鼠按同等体积生理盐水灌胃，连续4周；麻醉处死所有大鼠，取肝脏、脾脏并计算肝脏及脾脏指数，门静脉采血检测各组大鼠血清中丙氨酸转移酶（ALT）、天冬氨酸转移酶（AST）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及脂多糖（LPS）的含量，肝脏Masson染色和回肠HE染色观察组织形态变化，免疫组织化学染色（IHC）和蛋白质印迹法（Western blot）检测回肠中咬合蛋白-1（claudin-1）、闭合蛋白（occludin）的表达水平。结果 成功建立大鼠肝纤维化模型，正常对照组大鼠肝小叶结构清晰、汇管区无纤维沉积，CCL₄组大鼠肝小叶结构紊乱、中央静脉周围及汇管区纤维增生明显并可见大量纤维间隔形成，CCL₄+PFD组大鼠中央静脉周围及汇管区少量纤维增生、纤维间隔较CCL₄组变细变少；CCL₄组肝脏及脾脏指数较正常对照组均明显增高（P<0.01）,PFD治疗后肝脏及脾脏指数均降低（P<0.05）;CCL₄组血清中AST、ALT、IL-6,TNF-α及LPS含量均高于正常对照组、PFD治疗后有所降低（P<0.05）;CCL₄组大鼠回肠上皮黏膜结构较正常对照组紊乱、绒毛变短增宽、部分黏膜上皮出现断裂和脱落及炎性细胞浸润等，PFD治疗后回肠绒毛结构好转、高度（VH）及宽度（VW）较CCL₄组改善；CCL₄组肠道紧密连接（TJ）蛋白occludin及claudin-1表达均较正常对照组减少（P<0.05）、PFD治疗后其表达均有所增加（P<0.05）。结论 PFD在抗肝纤维化的同时能减轻小肠黏膜损伤，对大鼠肠道黏膜屏障具有保护作用，其机制可能与PFD上调回肠中肠上皮TJ蛋白claudin-1、occludin表达并减少血清LPS及炎症因子有关。

关键词

吡非尼酮 / 肝纤维化 / 肠黏膜屏障 / 紧密连接 / 脂多糖