鞣花酸对吗啡镇痛耐受的影响及机制

摘要

目的 探讨鞣花酸(EA)对大鼠吗啡镇痛耐受的影响和作用机制。方法 动物实验，将40只健康雄性SD大鼠随机分为生理盐水(NS)组、吗啡(MT)组、鞣花酸(EA)组、鞣花酸+吗啡(EA+MT)组，后3组吗啡鞘内注射给药建立大鼠吗啡镇痛耐受模型、4组大鼠灌胃生理盐水或相应药物，采用温水甩尾法和Von Frey法测定各组大鼠给药前和给药第1～7天的甩尾潜伏期(TFL)和机械缩足反射阈值(MWT);大鼠造模结束后麻醉处死并取中脑导水管周围灰质(PAG)组织，Western blot检测PINK1、LC3、P62蛋白的表达，硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量，透射电镜观察线粒体完整性；细胞实验，通过鞣花酸和吗啡处理人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞，设置对照(SHAM)组、吗啡(Mo)组、鞣花酸(Ea)组、鞣花酸+吗啡(Ea+Mo)组，采用MTT法测定细胞活力、ELISA法测定cAMP的含量、活性氧荧光探针检测ROS水平，Western blot测定PINK1、LC3、P62蛋白的表达。结果 动物实验结果显示，与MT组比较，EA+MT组大鼠TFL和MWT下降趋势较缓慢，差异具有统计学意义(P<0.05);与NS组比较，MT组PINK1蛋白、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、P62蛋白和MDA水平升高，差异具有统计学意义(P<0.05),且线粒体肿胀明显可见较多自噬体；与MT组比较，EA+MT组PINK1蛋白、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高而P62蛋白、MDA水平下降，差异具有统计学意义(P<0.05),线粒体轻度肿胀可见少量自噬体；细胞实验结果显示，与SHAM组比较，Mo组cAMP、ROS、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及P62蛋白表达水平均升高、细胞活力和PINK1蛋白表达水平下降，差异具有统计学意义(P<0.05);与Mo组比较，Ea+Mo组细胞活力、PINK1蛋白和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高而cAMP、ROS和P62蛋白表达水平下降，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 EA具有一定镇痛作用，可缓解大鼠吗啡镇痛耐受的形成，其作用机制可能与线粒体自噬有关。

关键词

鞣花酸 / 吗啡 / 镇痛耐受 / 线粒体自噬 / 中脑导水管周围灰质