Slfn1对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及机制

摘要

目的 探讨睡眠因子1（Slfn1）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及机制。方法 麻醉处死56只雄性SD大鼠，剪取腹主动脉到主动脉弓的血管段、分离中膜组织块体外培养4～5 d,采用免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达鉴定平滑肌细胞；感染复数（MOI）为1×10～2、1×10～3、1×10～4浓度Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测不同MOI组VSMCs中有绿色荧光蛋白（eGFP）的细胞/总细胞的百分比，确定最佳MOI用于后续实验，并分为Slfn1干扰组（用Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染）、Slfn1干扰对照组（用Slfn1的重组腺病毒干扰空载体质粒转染）及空白对照组（用正常血清培养）,采用聚合酶链式反应（PCR）检测3组Slfn1信使RNA（mRNA）的表达，CCK-8检测VSMCs增殖；提取RNA进行高通量RNA测序、并通过R语言分析，寻找差异基因，对差异基因进行基因本体（GO）和京都基因和基因组数据库（KEGG）富集分析。结果 原代培养VSMCs第10～15天时，细胞呈典型的“峰谷”样生长形态，细胞免疫荧光法显示VSMCs胞质内有α-SMA表达，鉴定为VSMCs; Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h后，1×10³ MOI组VSMCs中质粒的转染效率高（90%）;PCR结果示Slfn1干扰组VSMCs中Slfn1 mRNA表达减少（P<0.05）,CCK8结果显示Slfn1干扰组VSMCs增殖增加（P<0.05）;用Slfn1重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h,提取RNA进行高通量RNA测序及R语言分析结果显示，差异基因中上调基因94个，下调基因181个；GO和KEGG富集分析显示，Slfn1基因可能通过蛋白质糖基化、mRNA监测通路、鞘脂类信号通路等调控VSMCs的增殖。结论 基因干扰VSMCs的Slfn1可促进VSMCs的增殖，其机制可能与蛋白质糖基化、mRNA监测通路及鞘脂类信号通路等调控有关。

关键词

大鼠,Sprgue-Dawley / 细胞增殖 / 睡眠因子1 / 血管平滑肌细胞 / 蛋白质糖基化