LncRNA MIAT在颅内动脉瘤患者血清中的表达及靶向调节miR-331-3p对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的 分析长非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录物(MIAT)在颅内动脉瘤(IA)患者血清中的表达，探究其对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 数字减影血管造影诊断的IA患者15例为IA组，同期无IA家族史的健康参与者15例为对照组(C组),qRT-PCR检测两组受试者血清LncRNA MIAT和miR-331-3p水平；体外培养的VSMCs分为空白对照组(BC组)、过表达LncRNA MIAT阴性对照组(oe-NC组)、过表达LncRNA组(oe-MIAT组)、过表达LncRNA+过表达miR-331-3p阴性对照组(oe-MIAT+miR-331-3p-NC组)及过表达LncRNA+过表达miR-331-3p组(oe-MIAT+miR-331-3p mimic组);采用qRT-PCR检测VSMCs中LncRNA MIAT、miR-331-3p表达，MST测定VSMCs 24、48、72 h时的细胞活力(OD值),EdU染色测定VSMCs增殖，AnnexinⅤ/7-AAD双染法测定VSMCs凋亡，Western blot分析VSMCs中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3表达；双荧光素酶报告、RNA免疫共沉淀验证LncRNA MIAT、miR-331-3p靶向关系。结果 与C组相比，IA组患者血清LncRNA MIAT相对表达量显著升高，血清miR-331-3p相对表达量显著降低(P<0.05);与BC组及oe-NC组相比，oe-MIAT组、oe-MIAT+miR-331-3p-NC组LncRNA MIAT相对表达量、凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax表达增高，miR-331-3p的相对表达量、24 h、48 h、72 h的OD值、EdU阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均下降(P<0.05);oe-MIAT+miR-331-3p-mimic组与oe-MIAT+miR-331-3p-NC组、oe-MIAT组相比，凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax表达下降，miR-331-3p的相对表达量、24 h、48 h、72 h的OD值、EdU阳性细胞比例、Bcl-2蛋白水平均显著增高(P<0.05);双荧光素酶报告、RNA免疫共沉淀表明LncRNA MIAT和miR-331-3p之间存在负向调控。结论 LncRNA MIAT在IA患者血清中高表达，高表达的LncRNA MIAT可通过下调miR-331-3p表达诱导VSMCs过度凋亡、抑制VSMCs增殖，参与IA发生或进展。

关键词

颅内动脉瘤 / 长非编码RNA / 心肌梗死相关转录物 / 血管平滑肌细胞 / 细胞凋亡 / 细胞增殖