稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^TM CHO细胞系的建立及鉴定

摘要

目的 构建稳定表达细胞色素P450 2B6（CYP2B6）的Flp-In^TM CHO细胞系。方法 将Flp-In^TM CHO细胞分为Flp-In^TM CHO组、Flp-In^TM CHO空载体组及Flp-In^TM CHO-CYP2B6组，通过Lipofectamine2000转染试剂，分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^TM CHO空载体组细胞和Flp-In^TM CHO-CYP2B6组细胞中，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性，用四氮唑盐（MTS）测定转染CYP2B6的Flp-In^TM CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果 与Flp-In^TM CHO组和Flp-In^TM CHO空载体组相比，Flp-In^TM CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.01）、酶活性显著增加（P<0.001）,对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加（P<0.001）。结论 成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^TM CHO细胞系，为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。

关键词

细胞色素P450 2B6 / 稳定表达 / 酶活性 / 环磷酰胺 / Flp-In^TM CHO细胞系