人乳腺癌原代细胞系的建立及其对药物的敏感性

摘要

目的 探讨人乳腺癌(BC)原代细胞系的培养建立并分析其药物敏感性。方法 取BC浸润性导管癌患者的BC组织4份，Ⅱ型胶原酶消化并培养于BC第1代培养基(BCMⅠ),细胞快速增殖时更换为杜氏改良Eagle培养基(DMEM),利用倒置显微镜观察细胞形态，明确是否成功培养无限传代的4种BC原代细胞系；采用短串联重复序列(STR)分析上述4种原代细胞系的特异性遗传标记；取对数生长期的4种BC原代细胞系，分为50 nmol/L多柔比星(Doxorubicin)组、50 nmol/L吡柔比星(Pirarubicin)组及对照(Control)组(不加药物),采用CellTiter法检测细胞活力判断对其药物的敏感性；收集上述细胞来源的4例BC浸润性导管癌患者的一般临床资料、病理资料[组织学类型、年龄、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、病理分级、淋巴结转移及月经情况等]及新辅助、术后辅助治疗方案信息，采用苏木精-伊红染色(HE)检测BC组织的形态学特征及BC分型，采用免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)观测BC组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、雄激素受体(AR)、细胞角蛋白5/6 (CK5/6)、增值细胞核抗原(Ki-67)、拓扑异构酶Ⅱ(TOP-Ⅱ)分子及HER-2基因的表达。结果 成功培养了4种永生化的乳腺癌原代细胞系，分别为BC8#、BC11#、BC19#及BC21#;STR检测4株乳腺癌原代细胞为没有交叉污染的人来源细胞系，这些乳腺癌原代细胞系有明确的临床病理特点、病理标志物检测、临床诊断及治疗方案结果及CellTiter-Glo试剂盒检测结果显示，50 nmol/L Doxorubicin可以不同程度的抑制BC8#、BC11#、BC19#及BC21#细胞生长(P<0.05);50 nmol/L Pirarubicin不同程度地抑制BC11#和BC19#细胞生长，但对BC8#和BC21#细胞生长没有作用(P<0.05)。结论 成功培养了4种永生化的乳腺癌原代细胞系，这4种乳腺癌原代细胞系对化疗药物Doxorubicin和Pirarubicin的反应不同。

关键词

乳腺癌 / 原代细胞系 / 培养体系 / 药物预测 / 新癌症模型 / CellTiter-Glo荧光细胞活力实验