靶向抑制m6A甲基化对肾间质纤维化的影响

摘要

目的 探讨m6A甲基化修饰在肾纤维化中的作用及评价m6A甲基化抑制剂对肾纤维化的干预效果。方法 使用C57BL/6小鼠建立单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction, UUO)诱导的小鼠肾纤维化模型，随机分为Sham组、UUO-3 d组、UUO-7 d组及UUO-14 d组，另设m6A抑制剂SAH干预组，SAH治疗第7天时处死小鼠；HE染色后进行肾损伤评分，运用Masson染色和Sirius red染色分析小鼠肾脏胶原累积情况；转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)以10μg/L的浓度处理HK-2细胞，分别在0 h、24 h、48 h和72 h时，采用m6A Dot blot检测总体m6A甲基化水平；通过RT-qPCR和IHC检测纤维化标志物(α-SMA、CollagenⅢ和FN1)、m6A相关基因(Mettl3、Mettl14、Alkbh5和FTO)的mRNA和蛋白表达。结果 m6A甲基化修饰水平随着UUO术后时间的延长逐渐增加，而Mettl3、Mettl14、Alkbh5及FTO的mRNA或蛋白表达随着纤维化水平的增加而显著减少(P<0.01);TGF-β处理显著增加HK-2细胞中m6A的甲基化修饰水平，具有时间依赖效应(P<0.05);SAH显著抑制UUO诱导α-SMA、CollagenⅢ及FN1的蛋白表达(P<0.01),显著减少肾间质区域的胶原沉积，明显改善UUO诱导的肾损伤和肾间质纤维化(P<0.01)。结论 m6A甲基化修饰在肾纤维化发展中起关键作用，m6A甲基化抑制剂SAH可通过调节其修饰水平显著改善肾纤维化。

关键词

肾纤维化 / 单侧输尿管结扎 / N⁶-甲基腺苷修饰 / 脂肪质量和肥胖相关蛋白