艳山姜挥发油调控KLF4的表达对高糖诱导血管平滑肌细胞自噬的作用机制

摘要

目的 探讨艳山姜挥发油(essential oil of fructus alpiniae zerumbet,EOFAZ)基于肠道富集Krüppellike因子(krüppel-like factor 4,KLF4)信号，对高糖(high glucose, HG)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)自噬流障碍的作用。方法 取VSMCs,以35 mmol/L葡萄糖诱导不同时间分为0 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组及96 h组，采用MTT法检测细胞存活率，Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)相关蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬接头蛋白1(sequestosome-1,p62)及KLF4的表达水平；联用自噬抑制剂氯喹(chloroquine, CQ)分析EOFAZ对自噬的作用，将大鼠VSMCs分为Control组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(35 mmol/L葡萄糖)、低剂量EOFAZ组(35 mmol/L葡萄糖+1μg/L EOAFZ)、高剂量EOFAZ组(35 mmol/L葡萄糖+4μg/L EOFAZ)、CQ组(35 mmol/L葡萄糖+10μmol/L CQ)及CQ+EOFAZ组(35 mmol/L葡萄糖+10μmol/L CQ+4μg/L EOFAZ);采用Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、p62及KLF4的表达水平，细胞免疫荧光法检测p62的表达水平；采用siRNA技术敲低大鼠VSMCs内KLF4的表达，分为si NC组(空载体阴性对照)、si NC+HG组(si NC+35 mmol/L葡萄糖)、si NC+低剂量EOFAZ组(35 mmol/L葡萄糖+1μg/L EOFAZ)、si NC+高剂量EOFAZ组(35 mmol/L葡萄糖+4μg/L EOFAZ)、敲低KLF4(siRNA KLF4,siKLF4)组、si KLF4+HG组(si KLF4+35 mmol/L葡萄糖)、si KLF4+低剂量EOFAZ组(si KLF4+35 mmol/L葡萄糖+1μg/L EOFAZ)和si KLF4+高剂量EOFAZ组(si KLF4+35 mmol/L葡萄糖+4μg/L EOFAZ),Western blot法检测p62和KLF4的蛋白表达水平。结果 35 mmol/L葡萄糖孵育24 h、48 h、72 h及96 h使VSMCs细胞增殖呈时间依赖性增加(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62及KLF4的蛋白表达水平上调(P<0.01);与HG组比较，低、高剂量EOFAZ组可以不同程度下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62以及KLF4的蛋白表达水平(P<0.01)和p62免疫荧光水平；与CQ组比较，CQ+EOFAZ组可下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62以及KLF4的蛋白表达水平(P<0.01)和p62免疫荧光水平；与si KLF4+HG组比较，si KLF4+EOFAZ高剂量组降低p62与KLF4的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 EOFAZ改善HG诱导的VSMCs细胞自噬流障碍，其作用涉及对KLF4的表达水平的调节。

关键词

肠道富集Krüppellike因子 / 艳山姜挥发油 / 血管平滑肌细胞 / 自噬流障碍 / 氯喹