1,8-桉叶油素对ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及机制

摘要

目的 探讨1,8-桉叶油素(1, 8-Cineole)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及机制。方法 取对数生长期的人单核细胞THP-1,使用100.00μg/L佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导分化成THP-1源性巨噬细胞，将THP-1源性巨噬细胞分为Control组(同等体积的培养基)和各浓度ox-LDL组(0.08 mg/L、0.80 mg/L、8.00 mg/L及80.00 mg/L),采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)实验检测ox-LDL对THP-1源性巨噬细胞的毒性；将THP-1源性巨噬细胞分为Control组和各浓度1, 8-Cineole组(1.00μmol/L、5.00μmol/L、25.00μmol/L、125.00μmol/L及625.00μmol/L),采用MTT实验检测1, 8-Cineole对THP-1源性巨噬细胞活性的影响；以浓度为80.00 mg/L ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分化为泡沫细胞，将泡沫细胞分为Control组、ox-LDL组(80.00 mg/L ox-LDL)及1, 8-Cineole组[ox-LDL 80.00 mg/L+各浓度1, 8-Cineole(1.00μmol/L、5.00μmol/L、25.00μmol/L、125.00μmol/L及625.00μmol/L)],采用MTT实验检测1, 8-Cineole对ox-LDL诱导THP-1泡沫细胞活力的影响；80.00 mg/L ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分化为泡沫细胞模型，分为Control组(同等体积的培养基)、ox-LDL组(80.00 mg/L ox-LDL)、低剂量1, 8-Cineole组(80.00 mg/L ox-LDL和1.00μmol/L 1, 8-Cineole)及高剂量1, 8-Cineole组(80.00 mg/L ox-LDL和5.00μmol/L 1, 8-Cineole),采用油红O染色实验检测脂质的积累和泡沫细胞的形成情况，尼罗红染色实验检测细胞脂质摄取情况，蛋白免疫印迹(Western blot)法分析巨噬细胞中A1类清道夫受体(A1 scavenger receptor, SR-A1)蛋白的表达，实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测SR-A1信使RNA(messenge RNA,mRNA)的表达。结果 与Control组比较，0.08～80.00 mg/L ox-LDL组和1.00～125.00μmol/L 1, 8-Cineole组对THP-1巨噬细胞均无毒性(P>0.05);与ox-LDL组比较，625.00μmol/L 1, 8-Cineole组细胞活力降低(P<0.05);与Control组比较，ox-LDL组细胞的脂滴含量增多(P<0.05),脂质的荧光强度增加(P<0.05),SR-A1蛋白和mRNA的表达增加(P<0.05);与ox-LDL组比较，低剂量和高剂量1, 8-Cineole组巨噬细胞内脂滴减少(P<0.05),脂质的荧光强度、降低SR-A1蛋白和mRNA的表达减少(P<0.05)。结论 1, 8-Cineole可抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的形成，其机制可能与SR-A1的表达下降有关。

关键词

泡沫细胞 / 巨噬细胞 / 清道夫受体,A类 / 1,8-桉叶油素 / 氧化低密度脂蛋白