环孢素A对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肠道自发绿色荧光的影响

摘要

目的 探讨斑马鱼肠道自发绿色荧光的原因及环孢素A(cyclosporine A,CsA)对自发荧光的影响，优化利用转基因(transgenic, Tg)斑马鱼Tg(abcb4:eGFP)筛选肿瘤多重耐药药物的方法。方法 选取受精后5天(five day post fertilization, 5 dpf)的野生型(wild type, WT)和Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼幼鱼，观察其肠道自发荧光；将鲢鱼胆汁注射到WT斑马鱼胚胎后观察荧光情况；检测不同处理浓度和不同处理时间的CsA对WT斑马鱼肠道自发荧光的影响；10μmol/L CsA处理2 h对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光检测的影响；Western blot检测CsA对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼b4型ATP结合盒(ATP-binding cassette b4,Abcb4)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, eGFP)表达的影响。结果 斑马鱼肠道存在自发荧光，可影响Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼的荧光检测准确度；鲢鱼胆汁在斑马鱼胚胎中可激发出绿色荧光；CsA可抑制斑马鱼肠道自发荧光，其中10μmol/L CsA处理2 h可达到最佳抑制效应，且不影响斑马鱼Abcb4和eGFP蛋白表达。结论 斑马鱼肠道自发荧光可能为胆红素所致，10μmol/L CsA处理2 h可有效抑制斑马鱼肠道自发荧光，提高Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼药物筛选时荧光检测的准确度。

关键词

环孢素A / 转基因斑马鱼 / 斑马鱼b4型ATP结合盒 / 自发荧光