hnRNPK对非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭的作用及其机制

摘要

目的 探讨核不均一核糖核蛋白(hnRNPs)K(hnRNPK)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移及侵袭中的作用及其可能机制。方法 选择人肾上皮细胞系293T和非小细胞肺癌细胞系(NCI-H292和PC-9)作为细胞来源，设计2条针对hnRNPK的短发夹RNA序列(hn shRNA1和hn shRNA2)以及一条作为阴性对照的shRNA(shNC),构建携带hn shRNA1、hn shRNA2和shNC的重组质粒(shK-1、shK-2和shNC),构建过表达肌动蛋白丝相关蛋白1样蛋白2(AFAP-1L2,也称为XB130)的重组质粒(ovXB130)或对照重组质粒(ovNC),采用感染和转染方法分别建立沉默hnRNPK的细胞系(分别命名为shK-1组和shK-2组)及其对照组(shNC组),在shK-1组、shK-2组和shNC组中过表达XB130或对照，从而产生XB130过表达组(shK-1-ovXB130、shK-2-ovXB130)以及XB130过表达对照组(shK-1-ovNC、shK-2-ovNC及shNC-ovNC组);采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测shK-1组、shK-2组和shNC组中NCI-H292和PC-9细胞中XB130、hnRNPK信使核糖核酸(mRNA)的表达，采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测shK-1组、shK-2组、shNC组、shK-1-ovXB130组、shK-2-ovXB130组、shK-1-ovNC组、shK-2-ovNC组和shNC-ovNC组中NCI-H292和PC-9细胞中XB130、hnRNPK的蛋白表达，采用实时细胞分析(RTCA)和集落形成实验检测上述各组NCI-H292和PC-9细胞的细胞增殖和集落形成情况，采用划痕愈合实验和侵袭实验(Transwell)检测划痕愈合面积和侵袭细胞数量。结果 与shNC组相比，shK-1组和shK-2组中NCI-H292和PC-9细胞中hnRNPK和XB130的mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.01)。与XB130过表达对照组相比，XB130过表达组中NCI-H292和PC-9细胞中XB130蛋白表达升高(P<0.001),而hnRNPK蛋白表达降低(P<0.001),与shNC-ovNC组相比，shK-1+ovNC组和shK-2+ov-NC组细胞增殖和集落数量减少(P<0.001)、划痕愈合面积和侵袭细胞数量减少(P<0.001);XB130过表达对照组细胞增殖增加和集落数量增多(P<0.001)、划痕愈合面积增大和侵袭细胞数量增多(P<0.001)。结论 hnRNPK可促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭，其机制与对XB130表达的调控有关。

关键词

核不均—核糖核蛋白K / 细胞增殖 / 细胞迁移 / 细胞侵袭 / 非小细胞肺癌