LncRNA FOXD2-AS1调节miR-338-5p/HMCN1轴对宫颈癌细胞增殖和凋亡及上皮间质转化的影响

摘要

目的 探究长链非编码RNA FOXD2反义RNA1(long non-coding RNA FOXD2 antisense RNA1, LncRNA FOXD2-AS1)调节微小RNA-338-5p(microRNAs-338-5p, miR-338-5p)/HMCN1轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法 取宫颈癌组织与癌旁组织并培养HcerEpic、HeLa细胞，采用qRT-PCR检测宫颈癌组织及细胞中LncRNA FOXD2-AS1和miR-338-5p水平，生物信息学和双荧光素酶实验检测LncRNA FOXD2-AS1、HMCN1分别与miR-338-5p的靶向关系；将HeLa细胞分为对照组(Control组)、si-NC组、si-FOXD2-AS1组、si-FOXD2-AS1+anti-NC组及si-FOXD2-AS1+anti-miR-338-5p组；采用Edu检测细胞增殖能力，Annexin V-FITHCA/PI检测细胞凋亡情况，Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞核增殖抗原标记物(nuclear proliferating antigen marker, Ki67)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase 3, C-caspase-3)、上皮细胞钙黏蛋白(epithelial cadherin, E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(neural cadherin, N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及HMCN1蛋白表达水平；通过裸鼠移植瘤实验验证LncRNA FOXD2-AS1对宫颈癌移植瘤生长及miR-338-5p/HMCN1轴的影响。结果 在宫颈癌组织及宫颈癌细胞中LncRNA FOXD2-AS1高表达，miR-338-5p低表达(P<0.05);生物信息学和双荧光素酶分析显示，LncRNA FOXD2-AS1、HMCN1分别与miR-338-5p存在靶向结合位点；与si-NC组比较，si-FOXD2-AS1组细胞Edu阳性率及LncRNA FOXD2-AS1、HMCN1、Cyclin D1、Ki67、N-cadherin、Vimentin表达降低，细胞凋亡率及miR-338-5p、Bax、C-caspase-3、E-cadherin表达升高(P<0.05);与si-FOXD2-AS1+anti-NC组比较，si-FOXD2-AS1+anti-miR-338-5p组细胞Edu阳性率及HMCN1、Cyclin D1、Ki67、N-cadherin、Vimentin表达升高，细胞凋亡率及miR-338-5p、Bax、C-caspase-3、E-cadherin表达降低(P<0.05);裸鼠移植瘤实验结果显示，与si-NC组比较，si-FOXD2-AS1组裸鼠移植瘤体积生长缓慢、质量减轻，LncRNA FOXD2-AS1、HMCN1表达水平降低，miR-338-5p表达水平升高(P<0.05)。结论 沉默LncRNA FOXD2-AS1可通过调控miR-338-5p/HMCN1信号轴，抑制宫颈癌细胞增殖及EMT,促进癌细胞凋亡。

关键词

长链非编码RNA FOXD2反义RNA1 / 微小RNA-338-5p / HMCN1 / 宫颈肿瘤 / 细胞增殖