miR-27a-3p通过靶向HIPK2对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

摘要

目的 探索miR-27a-3p通过靶向同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain interacting protein kinase 2,HIPK2)对缺氧复氧(hypoxia reoxygenation, H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法 使用H9c2细胞进行缺氧复氧处理，建立H/R模型，并分为H/R组、H/R+miR-NC组(转染miR-27a-3p阴性对照)、H/R+miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p mimics)、H/R+miR-27a-3p+pcDNA-NC组(共转染miR-27a-3p和pcDNA-NC)、H/R+miR-27a-3p+pcDNA-HIPK2组(共转染miR-27a-3p和pcDNA-HIPK2),对照组为正常培养的细胞；各组转染48 h后进行H/R处理，噻唑蓝(MTT)法和EdU染色法检测各组细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测各组细胞自噬水平；酶联免疫吸附(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)水平；实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-27a-3p、HIPK2 mRNA表达水平；Western blot法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、HIPK2、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ,LC3-Ⅱ)及p62蛋白表达量；双荧光素酶报告实验验证miR-27a-3p与HIPK2靶向关系。结果 与对照组相比，H/R组H9c2细胞LDH、CK、TNF-α及IL-17水平、细胞凋亡率、自噬囊泡数及HIPK2 mRNA及HIPK2、Bax及LC3-Ⅱ蛋白表达量升高，而细胞活力、EdU阳性率、miR-27a-3p、Bcl-2及p62蛋白表达水平降低(P<0.05);过表达miR-27a-3p可降低细胞凋亡率、自噬囊泡数、HIPK2 mRNA、HIPK2、Bax及LC3-Ⅱ蛋白表达量、LDH、CK、TNF-α及IL-17水平，增加细胞活力、EdU阳性率、Bcl-2及p62蛋白表达量(P<0.05);过表达HIPK2可逆转过表达miR-27a-3p对H/R诱导的H9c2细胞损伤的保护作用(P<0.05);miR-27a-3p可靶向负调控HIPK2表达(P<0.05)。结论 miR-27a-3p可能通过靶向下调HIPK2减少H/R诱导的H9c2细胞中炎性细胞因子释放，抑制细胞凋亡和自噬，减轻细胞损伤。

关键词

微小RNA-27a-3p / 同源结构域相互作用蛋白激酶2 / 缺氧复氧 / 心肌细胞 / 损伤