膝痹疏通汤通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的机制

摘要

目的 探讨膝痹疏通汤通过调控Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路抑制膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠软骨细胞凋亡的机制。方法 采用手术法建立大鼠前后交叉韧带切断术模型，将60只雄性大鼠随机分为假手术组(仅做皮肤切开术)、模型组(手术诱导KOA)、膝痹疏通汤低剂量组(1 g/kg,灌胃)、膝痹疏通汤中剂量组(2 g/kg,灌胃)、膝痹疏通汤高剂量组(4 g/kg,灌胃)及盐酸氨基葡萄糖组(1 000 mg/kg,灌胃),每组10只；56 d后对各组大鼠行奎森功能障碍指数(lequesne, MG)评分，观察大鼠的行为学变化；采用HE染色行膝关节软骨组织病理组织学分析并评分；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)因子表达水平；TUNEL染色观察软骨细胞凋亡情况；Western blotting检测软骨细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(Bax)和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt、Wnt3a、β-catenin表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠Lequesne MG评分、组织病理学评分、TNF-α、IL-1β、IL-6、软骨细胞凋亡比例、Caspase-3、Bax、Wnt、Wnt3a显著升高(P<0.05),Bcl-2、p-β-catenin显著降低(P<0.05);与模型组比较，膝痹疏通汤中、高剂量组和盐酸氨基葡萄糖组Lequesne MG评分、组织病理学评分、TNF-α、IL-1β、IL-6、软骨细胞凋亡比例、Caspase-3、Bax、Wnt、Wnt3a显著降低(P<0.05),Bcl-2、p-β-catenin显著增加(P<0.05);与膝痹疏通汤低剂量组比较，膝痹疏通汤中、高剂量组和盐酸氨基葡萄糖组Lequesne MG评分、组织病理学评分、TNF-α、IL-1β、IL-6、软骨细胞凋亡比例、Caspase-3、Bax、Wnt、Wnt3a显著降低(P<0.05),Bcl-2、p-β-catenin显著增加(P<0.05);与膝痹疏通汤中剂量组和盐酸氨基葡萄糖组比较，膝痹疏通汤高剂量组Lequesne MG评分、组织病理学评分、TNF-α、IL-1β、IL-6、软骨细胞凋亡比例、Caspase-3、Bax、Wnt、Wnt3a显著降低(P<0.05),Bcl-2、p-β-catenin显著增加(P<0.05)。结论 膝痹疏通汤能够改善KOA大鼠炎症反应和软骨细胞凋亡，其机制可能涉及对Wnt/β-catenin信号通路的调节。

关键词

膝痹疏通汤 / 膝骨关节炎 / 软骨细胞凋亡 / Wnt/β-catenin信号通路