lncRNA TUG1对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤模型的抗炎作用及机制

摘要

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导的内皮细胞损伤模型中的抗炎作用及机制，探讨lncRNA TUG1在动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)中可能的作用。方法 人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)按ox-LDL不同浓度分为5组，ox-LDL 0、25、50、100及150 mg/L组，考察ox-LDL的最佳浓度；HUVECs细胞分为si-NC组(乱序对照)和si-TUG1组(TUG1沉默),考察TUG1沉默效果；进一步将HUVECs细胞分为4组，对照组(未处理)、ox-LDL组(ox-LDL处理)、ox-LDL+si-NC组(ox-LDL处理后转染乱序对照小干扰RNA)及ox-LDL+si-TUG1组(ox-LDL处理后沉默lncRNA TUG1表达);ELISA检测白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、基质金属蛋白酶2(matrix matalloproteinases 2,MMP-2)及MMP-9的蛋白表达；Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、E-选择素(endothelial selectin, E-Selectin)的蛋白表达，以及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/p65蛋白(p65 protein, P65)、p-P65、NF-κB抑制因子α(NF-kappa-B inhibitor alpha, IkBa)、p-IkBa的表达，并检测P65蛋白的核易位。结果 ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L,因此选该浓度用于后续实验；在用si-TUG1转染的HUVECs中，TUG1的表达显著下调；与对照组比较，ox-LDL组IL-8、MMP-2及MMP-9的表达水平升高(P<0.05);相较于ox-LDL+si-NC组，ox-LDL+si-TUG1组上述炎性因子的表达水平降低(P<0.05);相较于对照组，ox-LDL刺激可显著上调VCAM-1、ICAM-1、E-Selectin等黏附分子及NF-κB通路关键分子p-P65/P65、p-IkBa/IkBa比值，其中细胞质内p-P65/GAPDH比值亦显著增加(P<0.01);相较于ox-LDL+si-NC组，ox-LDL+si-TUG1组可逆转上述效应，显著降低上述指标表达水平(P<0.05),且细胞核内p-P65/PARP比值降低(P<0.01)。结论 沉默lncRNA TUG1可降低炎性因子水平，并通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应发挥抗ox-LDL诱导的内皮细胞损伤作用。

关键词

长链非编码RNA / 牛磺酸上调基因1 / 核因子κB / 炎症 / 动脉粥样硬化