磷酸化TauS214对HT22细胞和HEK293T细胞焦亡及炎症的影响

摘要

目的 构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)Tau蛋白异常磷酸化体外模型，探究磷酸化TauS214对细胞焦亡及炎症的影响。方法 以NCBI中人源Tau40(h-Tau40)基因序列为模板设计突变引物，采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增目的基因，经限制性内切酶(restriction endonuclease, RE)BglⅡ和EcoR I双酶切后定向克隆到载体pEGFP-C1中，构建Tau突变体(TauS214E、TauS214A、TauP301L),测序鉴定正确后将质粒瞬时转染至HEK293T和HT22细胞，免疫荧光法检测重组Tau蛋白定位情况，蛋白质印迹法检测pTauS214、pTauS404和Tau5的表达，检测NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin D N端片段(GSDMD-N)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果 成功构建Tau蛋白重组质粒并在两种细胞中稳定表达；Tau40和TauP301L组中pS214表达显著降低，pS404表达升高(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18、IL-6表达显著增加(P<0.05);TauS214E与Tau40相比，pS214表达显著升高，pS404表达显著降低(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18、IL-6表达显著降低(P<0.05)。结论 Tau40和TauP301L通过调节Tau蛋白磷酸化水平显著促进细胞焦亡和炎症反应，而TauS214E位点抑制炎性小体激活或阻断细胞焦亡。

关键词

阿尔茨海默病 / Tau蛋白 / 质粒 / 细胞焦亡 / 炎症 / HT22 / HEK293T