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摘要
目的 构建YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白3(YTH N6-methyladenosine RNA binding protein F3,YTHDF3)稳定沉默的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株。方法 数据库分析YTHDF3在乳腺癌中的表达及其与预后的相关性,选定蛋白研究靶点;利用人肾上皮细胞293T细胞产生含有YTHDF3-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒颗粒,转染MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞系,并利用嘌呤霉素筛选不含嘌呤抗性的阴性细胞,构建YTHDF3稳定沉默的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株;将MCF-7和MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(shNC组,转染无意义序列)、shY3-1组(转染沉默YTHDF3的第一条shRNA)及shY3-2组(转染沉默YTHDF3的第二条shRNA);实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测YTHDF3 mRNA表达,Western blot检测YTHDF3蛋白沉默效率。结果 YTHDF3在乳腺癌不同内在分子亚型中高表达,且其高表达与不良预后显著相关;经嘌呤霉素筛选后,成功获得sh-NC组、shY3-1组和shY3-2组稳定转染的MCF-7和MDA-MB-231细胞系;与sh-NC组相比,shY3-1组和shY3-2组细胞的YTHDF3蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 初步构建了YTHDF3稳定沉默的MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株。
关键词
乳腺肿瘤
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慢病毒
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RNA干扰
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YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白3
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m6A修饰
Key words
YTHDF3稳定沉默MCF-7和MDA-MB-231细胞株构建及筛选[J].
贵州医科大学学报, 2025, 50(08): 1162-1168 DOI:10.19367/j.cnki.2096-8388.2025.08.007