基于JAK2-STAT3通路探究巴马汀抗脓毒症炎性反应机制

摘要

目的 探究巴马汀通过调控Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路抗脓毒症的作用机制。方法 将90只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、巴马汀组(5.0 mg/kg)、Coumermycin A1组(JAK2激活剂，4.0 mg/kg)、AG490组(JAK2抑制剂，8.0 mg/kg),以及巴马汀+Coumermycin A1组，每组15只。用红外额温度计检测体温，苏木精伊红染色观察肺、肝、肾组织病理，酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和C-反应蛋白水平，Western blot检测血液中JAK2、STAT3、高迁移率族蛋白-1、TOLL样受体4(TOLL-like receptor 4,TLR4)蛋白表达。将小鼠RAW264.7巨噬细胞分为对照组、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)组及巴马汀(16、64、128 mg/L)组，用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法、比色法分别检测细胞增殖和乳酸脱氢酶释放，免疫细胞化学染色检测TLR4及JAK2阳性表达。另取RAW264.7细胞分为正常对照组、LPS组、巴马汀组(128 mg/L)、Ad-JAK2组、Ad-NC组及巴马汀+Ad-JAK2组，MTT法检测细胞增殖，免疫细胞化学染色法检测TLR4及JAK2阳性表达，ELISA法检测TNF-α、IL-6水平，反转录酶-聚合酶链反应法检测JAK2、STAT3基因表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠腹泻、死亡及肝、肾、肺组织炎性浸润严重，体温升高，血清炎症因子及血液中单核细胞JAK2/STAT3通路及相关蛋白表达升高(P<0.05);巴马汀及AG490可抑制JAK2/STAT3通路及相关蛋白表达，缓解小鼠死亡及肝、肾、肺组织炎性浸润，抑制小鼠体温升高及血清炎性因子表达(P<0.05),相反Coumermycin A1可逆转巴马汀上述作用(P<0.05);体外实验发现，巴马汀可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖、JAK2及STAT3表达且呈剂量依赖性，但不影响乳酸脱氢酶释放(P<0.05);上调JAK2表达可逆转巴马汀抑制RAW264.7细胞增殖、TNF-α及IL-6炎性因子分泌、JAK2/STAT3通路及TLR4表达的作用(P<0.05)。结论 巴马汀抗脓毒症炎性反应的作用机制与抑制JAK2/STAT3通路有关。

关键词

巴马汀 / 脓毒症 / Janus激酶/信号转导和转录激活因子通路 / 巨噬细胞 / 炎性反应