吡非尼酮通过调控Yes相关蛋白1改善大鼠肝纤维化的机制

摘要

目的 探讨吡非尼酮（pirfenidone, PFD）通过转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）/Smad信号通路和Yes相关蛋白1（Yes-associated protein, YAP1）信号传导抑制肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSCs）活化改善大鼠肝纤维化的作用。方法 18只雄性SD大鼠随机均分为3组：Normal组（正常未处理）、Model组（25%CCl₄ 1 mL/kg+300 mg/kg PBS）及PFD组（25%CCl₄ 1 mL/kg+300 mg/kg PFD）,Model组和PFD组腹腔注射CCl₄ 8周后，PFD组用PFD干预治疗2周，Normal组和Model组灌胃同等剂量PBS;采用超声弹性成像检测大鼠肝左叶肝脏硬度值（liver stiffness measurement, LSM）,通过病理天狼星红染色评估肝纤维化程度。大鼠HSCs细胞系HSC-T6分为Control组及0、2、4、8、16、32及64 mmol/L PFD组（10μg/L TGF-β1+0、2、4、6、8、16、32、64 mmol/L PFD）,CCK-8检测细胞增殖并计算半抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC₅₀),5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（5-ethynyl-2-deoxyuridine, EdU）染色、细胞划痕检测细胞增殖和迁移；蛋白免疫印迹检测大鼠肝脏组织和HSC-T6细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、胶原Ⅰ（CollagenⅠ）、CollagenⅢ以及TGF-β/Smad通路蛋白、YAP1及p-YAP1表达。结果 Model组大鼠肝脏LSM较Normal组明显增加，PFD组肝脏LSM较Model组减低（P<0.05）;天狼星红染色结果示Model组胶原纤维较Normal组增多（P<0.05）,PFD治疗后胶原纤维明显减少（P<0.05）;CCK-8结果显示PFD处理48 h后HSC-T6的IC₅₀为5.579 mmol/L,EdU染色和细胞划痕实验结果表明PFD处理后HSCs的EdU阳性细胞呈浓度依赖性减少（P<0.05）、迁移能力明显受到抑制（P<0.05）;蛋白免疫印迹结果显示PFD组大鼠和HSC-T6细胞4、6 mmol/L PFD组的α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ及CollagenⅢ的表达均较Model组和0 mmol/L PFD组降低（P<0.05）,TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和YAP1的表达也不同程度减少（P<0.05）。结论 PFD通过抑制HSCs增殖活性、抑制其迁移能力并减少细胞外基质沉积发挥抗大鼠肝纤维化作用，这可能与PFD抑制TGF-β/Smad通路和YAP1信号传导有关。

关键词

吡非尼酮 / 肝纤维化 / TGF-β/Smad信号通路 / 肝星状细胞 / Yes相关蛋白1