肿瘤细胞选择性驱动BLM基因沉默对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

摘要

目的 构建肿瘤细胞选择性激活的hTERT启动子驱动的shRNA-BLM重组质粒并探讨其对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)细胞BLM基因表达、增殖和迁移侵袭的影响。方法 构建hTERT启动子驱动的shRNA-BLM重组质粒pCDH-hTERT-shBLM,通过酶切电泳及测序验证载体构建；将质粒转染至三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MDA-MB-436)及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A),在质粒转染后的24、48及72 h采用CCK-8法检测细胞增殖活力；采用克隆形成实验检测细胞增殖，在质粒转染后的48 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率，并采用Western blot检测BLM蛋白及凋亡相关蛋白(如Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8)的表达；在质粒转染后的24 h采用Transwell实验评估迁移侵袭能力，Western blot检测上皮-间质转化(EMT)标志物(如E-cadherin, N-cadherin, Vimentin)的表达。结果 成功构建特异性靶向肿瘤的pCDH-hTERT-shBLM载体质粒，Western blot结果显示其仅在TNBC细胞中有效沉默BLM表达(P<0.05);CCK-8结果显示，与对照组相比，pCDH-hTERT-shBLM组的TNBC细胞存活率显著降低(P<0.05);克隆形成实验和流式细胞术实验结果显示，与对照组相比，pCDH-hTERT-shBLM组细胞的克隆形成数减少，细胞凋亡率升高(P<0.05);Western blot结果显示，TNBC细胞中Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8蛋白表达上调而Bcl-2蛋白下调(P<0.05);同时，Transwell实验结果显示，细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01),EMT标志物E-cadherin表达升高，N-cadherin和Vimentin的表达降低(P<0.01)。结论 hTERT启动子驱动的shRNA-BLM可选择性的靶向沉默TNBC细胞BLM蛋白表达，抑制TNBC细胞增殖、迁移侵袭并诱导凋亡，其机制可能与调控凋亡通路及逆转EMT进程相关。

关键词

BLM / 三阴性乳腺肿瘤 / hTERT / 靶向治疗 / 凋亡 / 迁移 / 侵袭