缺氧诱导的外泌体miR-148a-3p对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制

摘要

目的 探讨缺氧条件下外泌体微小RNA-148-3p（microRNA-148-3p, miR-148-3p）对SW480细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响及其对DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）与细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3）表达的调控作用机制。方法 CoCl₂处理SW480细胞构建缺氧模型，细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞活力；采用差异超速离心法提取细胞外泌体，通过透射电镜（transmission electron microscopy, TEM）与纳米流式分析其形态、粒径、浓度及标志蛋白CD9（cluster of differentiation 9）、CD63的表达；收集常氧与缺氧SW480细胞的外泌体，分别与常氧SW480细胞共培养24 h;采用Transwell和划痕实验评估细胞侵袭与迁移，流式细胞术检测细胞周期与凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR）检测miR-148-3p、DNMT1及SOCS3信使RNA（messenger RNA,mRNA）表达，蛋白质印迹法检测DNMT1和SOCS3蛋白表达。结果 与对照组相比，缺氧来源外泌体促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）,下调miR-148-3p与SOCS3 mRNA表达（P<0.05）,同时降低DNMT1和SOCS3蛋白水平（P<0.05）。结论 缺氧状态下SW480细胞外泌体促进SW480细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡，可能与抑制miR-148-3p表达来调控DNMT1/SOCS3通路有关。

关键词

缺氧 / 外泌体 / SW480细胞 / 微小RNA-148a-3p / DNMT1/SOCS3通路