麻疹减毒活疫苗对HeLa细胞的抑制作用

摘要

目的 探讨麻疹减毒活疫苗中麻疹病毒(measles virus, MV)对HeLa细胞的抑制效果。方法 取对数生长期HeLa细胞，按照不同感染复数(multiplicity of infection, MOI)分为高、中、低MOI组和对照组(MOI分别为10、5、1和0),采用CCK-8法测定MV对细胞活性的影响，荧光显色观察细胞核形态，流式细胞术检测细胞的凋亡率，实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, BAX)、半胱天冬酶3(Caspase-3)及切割形式的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-polyadenosine diphosphate ribose polymerase, c-PARP)的表达。结果 高MOI组MV感染HeLa细胞48 h后可明显观察到出现多核巨细胞和细胞脱落悬浮现象，高MOI组作用72 h细胞存活率最低，仅为(17.19±0.19)%,与对照组相比存活率具有明显差异(P<0.01);中MOI组于荧光显微镜下可观察到肿瘤细胞出现核碎裂现象，高、中、低MOI组和对照组的细胞凋亡率平均值分别为42.02%、11.6%、6.3%及2.8%,与对照组相比具有统计学意义(P<0.01);qPCR检测显示高MOI组和中MOI组中，促凋亡基因BAX表达分别为9.65±1.81和4.615±0.91,差异均具有统计学意义(P<0.05),但抑凋亡基因Bcl-2的表达差异无统计学意义(P>0.05);以不同浓度MV感染HeLa细胞72 h后，与对照组相比相关凋亡蛋白BAX、Caspase-3和c-PARP表达量升高。结论 麻疹减毒活疫苗对HeLa细胞的抑制作用具有时间剂量依赖性，其机制可能是病毒感染后诱导促凋亡基因BAX表达，激活下游Caspase-3和c-PARP表达后诱导细胞凋亡。

关键词

麻疹减毒活疫苗 / HeLa细胞 / 细胞凋亡 / Bcl-2相关X蛋白 / B细胞淋巴瘤/白血病-2基因