基于TLR4/MAPK/NF-κB信号通路研究毛大丁草活性成分群抗支气管哮喘小鼠的作用及机制

摘要

目的 采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导的小鼠支气管哮喘模型，探究毛大丁草活性成分群[active ingredient groups of Gerbera piloselloides(L.) Cass, GPH]的抗哮喘作用及对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路的影响。方法 将50只昆明小鼠随机均分为空白对照组(NC组)、模型组(0.1 mL含25μg OVA和2 mg氢氧化铝佐剂致敏+2%OVA溶液激发，OVA组)、GPH低剂量组(4.22 mg/kgGPH,GPH-L组)、GPH高剂量组(8.42 mg/kgGPH,GPH-H组)及地塞米松组(1 mg/kg, DXM组);通过抓鼻、挠痒次数等症状观察动物哮喘样行为，ELISA法检测小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid, BALF)中白细胞介素-6(interleukin, IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide sythase, iNOS)水平，苏木精-伊红(hema-toxylin-eosin staining, HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理学变化，过碘酸-雪夫反应(periodic acid-schiff reaction, PAS)染色法观察肺组织杯状细胞增生状况，免疫组织化学法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38)、磷酸化p38(phospho-p38,p-p38)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化JNK(phospho-JNK, p-JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2, p-ERK1/2)、TLR4以及NF-κB p65亚基(NF-κB p65 subunit, NF-κB p65)的表达。结果 与OVA组比较，GPH-H组小鼠哮喘行为学评分降低(P<0.01);血清和BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS水平降低(P<0.05);改善肺组织细胞坏死及边缘结构模糊，炎性细胞浸润程度(P<0.01);减少肺组织中杯状细胞数量和黏液产生情况，减轻糖原沉积水平(P<0.01);p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK1/2、TLR4和NF-κB p65蛋白的表达显著降低(P<0.01),但对p-ERK1/2的表达在各组中均无显著变化。结论 GPH可对小鼠支气管哮喘有明显保护作用，其作用机制可能与TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关。

关键词

毛大丁草活性成分群 / 支气管哮喘 / 炎症损伤 / TLR4/MAPK/NF-κB信号通路