TAC-PLGA微球对大鼠角膜移植排斥反应的作用

摘要

目的 探究他克莫司负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物(tacrolimus-loaded-poly-lactic-co-glycolic acid, TAC-PLGA)微球的制备方法，并评估其对大鼠角膜移植排斥反应的作用。方法 采用微流控制技术制备TAC-PLGA微球，观察微球的外观和大小，计算其载药量和包封率；30只SD雄性大鼠进行穿透性角膜移植造模术后随机均分为3组，滴眼液组(滴0.1%TAC滴眼液，0.02 mL/次，2次/d,共25 d)、空白组(术后立即结膜下注射1次生理盐水0.1 mL)和微球组[术后立即结膜下注射1次TAC-PLGA微球分散液0.1 mL (负载0.5 g/L TAC)];观察各组大鼠术后3天、1周、半月及1月的角膜移植物存活情况并计算免疫排斥反应指数(rejection index, RI),采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining, HE)染色观察大鼠术后半月、1月角膜植片的组织形态学变化，免疫组织化学检测CD4、CD8的表达，角膜共聚焦显微镜观察大鼠术后1月角膜植片新生血管生长情况。结果 制备所得TAC-PLGA微球粒径分布为(20±2)μm,载药量和包封率分别为(14.92±1.09)%和(70.86±5.18)%;术后3 d各组大鼠RI值比较，差异无统计学意义(P>0.05),术后1周、半月及1月微球组RI值低于滴眼液组及空白组(P<0.05);生存曲线提示微球组的角膜植片存活率高于另外两组(P<0.05);术后半月、1月微球组大鼠角膜植片的水肿程度、炎症细胞浸润程度及新生血管生长情况较滴眼液组、空白组轻；与滴眼液组和空白组相比，微球组角膜CD4、CD8的表达量更低(P<0.05);微球组大鼠的新生血管生长比滴眼液组和空白组更少(P<0.05)。结论 TAC-PLGA微球结膜下注射能够有效抑制角膜移植术后免疫排斥反应的发生，提高角膜植片存活率。

关键词

角膜移植 / 他克莫司 / 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 / 新生血管 / 免疫排斥反应