FOXO3下调VEGFA改善高糖诱导的小鼠肾小球足细胞间充质转化的作用研究

摘要

目的 观察叉头框O3(FOXO3)及血管内皮生长因子A(VEGFA)对高糖诱导的小鼠肾小球足细胞(MPC5)间充质转化的作用。方法 使用不同浓度、不同时间的葡萄糖刺激MPC5细胞，分为对照组(Control组)、高糖组(HG组),建立高糖足细胞间充质转化模型，Western blot、qRT-PCR检测VEGFA、FOXO3蛋白及Vegfa mRNA、Foxo3 mRNA表达的变化，并设渗透对照组(Mannitol组)排除渗透压对细胞的影响；提取细胞核、浆蛋白，Western blot检测FOXO3核蛋白及胞浆蛋白的表达；使用抗VEGFA单克隆抗体贝伐珠单处理细胞，分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+贝伐珠单抗组(HG+Bev组),观察VEGFA对足细胞间充质转化相关标志物蛋白表达的影响；慢病毒过表达Foxo3,设空载对照组(Vector组)、空载高糖组(HG+Vector组)、过表达Foxo3组(OE-FOXO3组)、过表达Foxo3高糖组(HG+OE-FOXO3组),Western blot检测VEGFA及间充质转化相关标志物蛋白表达，qRT-PCR检测Vegfa mRNA表达。结果 与Control组相比，HG组足细胞上皮表型蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达下降，间充质表型蛋白波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达增加，呈浓度依赖及时间依赖性，且不受渗透压的影响，同时FOXO3蛋白和Foxo3 mRNA表达降低，VEGFA蛋白和Vegfa mRNA表达增加(P<0.05);与Control组相比，HG组FOXO3核蛋白表达下降(P<0.05);与HG组相比，HG+Bev组足细胞表型蛋白E-cadherin、突触极蛋白(Synaptopodin)表达有所恢复(P<0.05),Vimentin和α-SMA蛋白表达水平降低(P<0.05);过表达FOXO3后，与HG+Vector组相比，HG+OE-FOXO3组抑制了细胞VEGFA蛋白和Vegfa mRNA的表达，同时抑制Vimentin、α-SMA蛋白表达，部分逆转了E-cadherin、Synaptopodin蛋白的表达(P<0.05)。结论 高糖可诱导MPC5细胞VEGFA表达增多并促进细胞发生间充质转化，FOXO3能抑制高糖诱导的VEGFA高表达，减轻细胞间充质转化。

关键词

高糖 / 血管内皮生长因子A / 叉头框O3 / 小鼠肾小球足细胞 / 间充质转化