LPS诱导的牙周炎症环境中PSAP对牙龈成纤维细胞衰老的调控作用

摘要

目的 探讨鞘脂激活蛋白原（PSAP）在牙龈卟啉单胞菌（Pg）来源的脂多糖（LPS）诱导牙龈成纤维细胞（HGFs）衰老中的调控作用。方法 分离培养HGFs并鉴定；设置空白对照组、不同浓度H₂O₂组和LPS组，通过细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）、实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）及衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色，筛选适宜LPS浓度构建HGFs衰老模型；设置N组和LPS组，采用RT-qPCR、蛋白质印迹法（Western blot）及SA-β-gal染色分析PSAP与HGFs衰老的相关性；利用慢病毒敲降PSAP,设置N组、shRNA-NC组和shRNA-PSAP组，通过CCK-8检测细胞增殖；设置shRNA-NC组、shRNA-NC+LPS组和shRNA-PSAP+LPS组，通过RT-qPCR、Western blot及SA-β-gal染色，分别评估细胞周期抑制指标（p16、p21）及衰老相关分泌表型因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）的表达变化。结果 100 mg/L LPS显著诱导HGFs衰老，PSAP表达上调（P<0.05）;敲降PSAP可促进细胞增殖（P<0.001）;与空载慢病毒+LPS组相比，PSAP敲降+LPS组衰老细胞阳性率、细胞周期抑制指标p16/p21水平及衰老相关分泌表型因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平均显著降低（P<0.05）。结论 PSAP在LPS诱导的HGFs衰老中发挥关键促进作用，靶向干预PSAP有望成为改善牙周炎微环境的潜在治疗策略。

关键词

牙周炎 / 牙龈成纤维细胞 / 细胞衰老 / 鞘脂激活蛋白原 / 脂多糖