SIRT2对三阴性乳腺癌细胞生长增殖和有氧糖酵解的调控作用及其机制

摘要

目的 探讨调节蛋白2(SIRT2)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖和有氧糖酵解的调控作用。方法 采用Kaplan-Meier Plotter评估SIRT2对TNBC预后的影响；RT-qPCR及Western blot检测MCF-10A人乳腺上皮细胞与MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞中SIRT2、丙酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达；免疫组化染色比较纤维腺病与TNBC组织中SIRT2、BCL2关联的X蛋白(Bax)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达；慢病毒载体构建SIRT2表达的TNBC细胞稳转株，通过CCK-8、Edu、Transwell检测SIRT2对TNBC细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响，Western blot检测细胞的凋亡情况；加利福尼亚大学圣塔克鲁兹分校基因组数据库(UCSC)和Spearman分析PKM2、LDHA表达及与糖酵解相关性；葡萄糖氧化酶-比色法检测SIRT2对糖酵解相关酶通路调控PKM2和LDHA的影响。结果 Kaplan-Meier生存分析结果显示，TNBC的SIRT2高表达组的无复发生存期(RFS)更短(P<0.05);RT-qPCR和Western blot发现SIRT2在MDA-MB-231细胞中高表达(P<0.05);免疫组织化学染色显示SIRT2、Bax在TNBC组织中高表达，而Bcl-2在TNBC中低表达(P<0.05);SIRT2表达促进TNBC细胞增殖，增强TNBC细胞的迁移和侵袭能力，敲低SIRT2可促进TNBC细胞促凋亡蛋白Bax、pro Caspase-3、cleaved Caspase-9的表达水平，抑制了抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(P<0.05);生物信息学分析显示PKM2和LDHA在TNBC中高表达，且相关性分析显示SIRT2表达与糖酵解通路呈正相关(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果显示，与MCF-10A相比，PKM2和LDHA在MDA-MB-231细胞中高表达(P<0.05);敲低SIRT2可减少TNBC细胞葡萄糖消耗和乳酸生成，下调PKM2和LDHA蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 SIRT2促进TNBC细胞有氧糖酵解及细胞生长增殖，其机制可能与SIRT2调控以及PKM2、LDHA表达有关。

关键词

节蛋白2 / 三阴性乳腺癌 / 凋亡 / 糖酵解 / 丙酮酸激酶M2型同工酶 / 乳酸脱氢酶A