原儿茶酸对黑色素瘤细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

摘要

目的 探讨原儿茶酸（PCA）通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路诱导黑色素瘤细胞凋亡的机制。方法 采用加权基因共表达网络分析（WGCNA）并结合基因表达综合数据库（GEO）差异表达分析，筛选出黑色素瘤关键基因基质金属蛋白酶1（MMP1）;基于高通量中药实验参考数据库（HERB）检索靶向MMP1的草药活性成分，经网络拓扑分析筛选及文献验证，鉴定出天然小分子化合物PCA;以不同浓度PCA处理人黑色素瘤细胞系MV3和A375细胞，通过CCK-8法、EdU实验评估PCA对MV3和A375黑色素瘤细胞增殖的影响；利用细胞划痕试验和Transwell实验分别检测PCA对细胞迁移和侵袭能力的影响；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平；结合网络药理学分析与分子对接，预测PCA的作用靶点与信号通路，Western blot检测PCA对PI3K/AKT信号通路关键蛋白及其磷酸化水平的影响。结果 CCK-8实验显示，PCA以剂量依赖性方式抑制A375和MV3细胞的增殖，其IC₅₀分别为（16.2±0.97）μmol/L和（14.75±1.22）μmol/L;EdU实验进一步证实PCA可抑制细胞增殖；划痕试验显示PCA能抑制细胞的迁移能力；Transwell实验表明PCA能抑制细胞的侵袭能力；流式细胞术显示，PCA处理后凋亡细胞比例明显增加；PCA可通过降低抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）水平、上调促凋亡蛋白[Bcl-2相关X蛋白（BAX）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3和caspase-8]表达水平来触发细胞凋亡；网络药理学分析及分子对接预测PCA可能靶向PI3K/AKT信号通路，Western blot进一步证实PCA可降低PI3K和AKT的磷酸化水平。结论 PCA可抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移与侵袭并诱导其凋亡，其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

关键词

黑色素瘤 / 原儿茶酸 / 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B / 凋亡

基金资助

国家自然科学基金项目(82460533); 贵州省科协青年人才托举工程项目(黔科协发[2025]30号)