铁死亡诱导剂Erastin联合PD-1抑制剂对MC38-OVA结直肠癌抗肿瘤活性的影响

摘要

目的 探讨铁死亡诱导剂Erastin联合程序性死亡蛋白-1（PD-1）抑制剂（anti-PD-1）对MC38-OVA结直肠癌的抗肿瘤作用及其可能机制。方法 20只MC38-OVA结直肠癌荷瘤小鼠随机均分为对照组（200μL PBS）、Erastin组（20 mg/kg Erastin）、anti-PD-1组（200μg anti-PD-1）、Erastin+anti-PD-1组，连续14 d观察荷瘤小鼠肿瘤生长情况，苏木精-伊红（HE）法观察肿瘤组织病理变化，Hoechst 33258染色检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫荧光法检测肿瘤组织CD31、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达；取MC38-OVA肿瘤细胞，设置对照组（10μL PBS）、Erastin组（40 mg/L Erastin）、anti-PD-1组（25 mg/L anti-PD-1）、Erastin+anti-PD-1组，二氢乙锭（DHE）法检测各组细胞活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞Fe²⁺、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平，将各组处理后的MC38-OVA细胞与CD8⁺T细胞按预设效靶比共培养，采用流式细胞仪检测CD8⁺T细胞的杀伤能力。结果 与对照组比较，Erastin组、anti-PD-1组、Erastin+anti-PD-1组小鼠肿瘤体积、重量及CD31阳性率降低，细胞凋亡率升高（P<0.05）,且Erastin+anti-PD-1组抑瘤效果最强（P<0.05）;体外实验显示，与对照组比较，Erastin组、Erastin+anti-PD-1组细胞Fe²⁺、MDA水平升高，GSH水平降低（P<0.05）;在效应细胞∶靶细胞（E∶T）=1∶1、1∶2条件下，与空白组比较，Erastin处理组、anti-PD-1处理组和联合处理组CD8⁺T细胞杀伤效果增加（P<0.05）,且联合处理组MC38-OVA细胞铁死亡及CD8⁺T细胞抗肿瘤活性最强（P<0.05）。结论 Erastin联合PD-1抑制剂可协同诱导结直肠癌凋亡并增强CD8⁺T细胞抗肿瘤活性，其机制可能与促进氧化应激、铁代谢失衡及抑制肿瘤血管生成有关。

关键词

结直肠肿瘤 / CD8⁺T细胞 / 铁死亡 / 程序性死亡受体-1

基金资助

邯郸市科学技术研究与发展计划项目(24422083038ZC)