柠檬苦素通过靶向Skp2蛋白抑制非小细胞肺癌细胞增殖

摘要

目的 探讨柠檬苦素抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖能力及其分子作用机制。方法 首先通过MTT实验检测柠檬苦素对NSCLC细胞活性抑制能力；随后分别采用流式细胞技术检测细胞周期与凋亡、平板克隆形成实验检测低密度细胞增殖、细胞基质胶3D成球实验评价干细胞特性。接着通过Western blotting分析柠檬苦素抑制NSCLC细胞增殖的分子机制；通过细胞热位移测定（CETSA）证明柠檬苦素与靶蛋白结合能力；通过分子对接实验模拟柠檬苦素与靶蛋白相互作用位点。最后，通过小分子干扰RNA (siRNA)与S期激酶相关蛋白2 (Skp2)过表达细胞株构建，验证柠檬苦素通过作用Skp2发挥抑制NSCLC增殖的分子机制。结果 柠檬苦素通过诱导细胞周期G0/G1期阻滞以剂量依赖性方式抑制NSCLC细胞增殖，同时显著减弱NSCLC干细胞样特性。柠檬苦素结合Skp2蛋白并下调其蛋白水平，从而促进Skp2底物p27累积。Skp2特异siRNA干扰其表达后显著增强柠檬苦素抑制NSCLC细胞活性能力，而Skp2过表达拮抗柠檬苦素对NSCLC细胞活性抑制能力，进一步验证了柠檬苦素通过靶向Skp2抑制NSCLC细胞增殖的分子机制。结论 柠檬苦素通过靶向Skp2升高抑癌蛋白p27水平，从而抑制NSCLC细胞增殖，为柠檬苦素作为抗肿瘤药物研发提供了重要的理论依据。

关键词

柠檬苦素 / 非小细胞肺癌 / S期激酶相关蛋白2 / 细胞增殖

基金资助

广东省基础与应用基础研究基金项目（2022A1515011881;2021B1515140052）