RPA-毛细管电泳检测人腺病毒55型的方法建立及初步应用

摘要

目的 建立重组酶聚合酶扩增(RPA)技术联合毛细管电泳快速检测人腺病毒55型(HAdV55)的方法及初步应用。方法 构建HAdV55-Hexon质粒作为扩增模板，针对HAdV55保守区Hexon基因序列设计RPA特异性引物，对引物筛选和优化，并建立RPA扩增及联合毛细管电泳检测体系，进行了特异性、灵敏度、可靠性评价；对18份临床样本进行RPA-毛细管电泳检测。结果 构建了含有HAdV55-Hexon全长基因的质粒，获得一对扩增效率最高的RPA引物；HAdV55的RPA-毛细管电泳检测体系最低检出限为2.9×10～3 copies/mL,整个过程30 min即可完成，冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-HKU1)、甲型乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒标准品提取物用该体系检测时均为阴性，且检测常见的人腺病毒类型(HAdV3、HAdV4、HAdV7、HAdV16、HAdV21)时也均为阴性，可认为对HAdV55有较强的特异性检测；建立的RPA-毛细管电泳检测能够有效地检测出临床患者咽拭子中的HAdV55。结论 RPA联合毛细管电泳检测HAdV55方法的建立为其临床诊断提供了良好的基础。

关键词

人腺病毒55型 / 重组酶聚合酶扩增 / 毛细管电泳