模拟失重下缝隙连接蛋白43对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

摘要

目的 探究模拟失重下缝隙连接蛋白43(Cx43)对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法 将人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)作为研究对象，分为正常重力组(Con组)、模拟失重组(SMG组),并建立细胞模拟失重模型。两组细胞培养48 h后采用qRT-PCR和Western blotting检测HASMCs中Cx43的表达变化情况；加入缝隙连接蛋白抑制剂18-α-甘草次酸(18α-GA)后，两组再分成Con组、正常重力加抑制剂组、SMG组、模拟失重加抑制剂组(SMG+inhibitor组)。采用Western blotting检测模拟失重对HASMCs中的增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)等蛋白水平表达的影响，采用EdU检测HASMCs的增殖能力，采用流式检测HASMCs的凋亡情况。采用免疫荧光检测尾部悬吊大鼠颈动脉平滑肌细胞中Cx43的表达情况。结果 SMG组HASMCs回转失重培养48 h后，与Con组相比，HASMCs中Cx43的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。SMG+inhibitor组中的PCNA蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),BAX水平显著增高(P<0.05);与SMG组相比，SMG+inhibitor组HASMCs中EdU阳性细胞比率显著下降(P<0.05);流式结果表明，SMG+inhibitor组中HASMCs中的凋亡率显著升高(P<0.05)。尾吊大鼠免疫荧光结果表明，尾吊大鼠与正常大鼠相比，颈动脉平滑肌细胞中Cx43表达显著增多。结论 Cx43在模拟失重条件下促进HASMCs的增殖，抑制HASMCs的凋亡。

关键词

模拟失重 / 血管平滑肌细胞 / 缝隙连接蛋白43 / 增殖 / 凋亡

基金资助

国家自然科学基金(32071179,32100952)