构建治疗非酒精性脂肪性肝病的TREM2慢病毒载体

摘要

目的 构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体，观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对AML12肝细胞的影响，为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法 通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染AML12肝细胞系，利用qRT-PCR技术、Western blotting技术、流式细胞术检测转染效率，利用免疫荧光染色技术检测TREM2或sTREM2的表达和细胞定位；利用流式细胞术检测TREM2或sTREM2对体外NAFLD条件下细胞凋亡的影响和对静息态下细胞周期的影响；利用油红O染色观察脂质沉积变化情况。结果 与对照组相比，稳定转染细胞系中TREM2和sTREM2 mRNA水平明显升高，蛋白表达量明显升高，提示成功建立稳定转染细胞系。在体外NAFLD条件下，过表达TREM2可减轻AML12肝细胞的凋亡和脂质沉积(P<0.05)。静息态下，过表达TREM2或sTREM2均使得G1期细胞数目比例减少(P<0.05),S期细胞数目比例增多(P<0.01),而体外NAFLD条件均使得S期细胞数目比例减少(P<0.01),G2期细胞数目比例增多(P<0.01)。结论 肝细胞中TREM2的过表达可减少肝细胞凋亡和脂质沉积，进而保护肝细胞在NAFLD条件下免受损伤。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / AML12肝细胞 / TREM2 / 细胞凋亡