乙型肝炎病毒大表面蛋白诱导内质网应激调控p27 IRES翻译活性的机制研究

摘要

目的 探讨在乙型肝炎病毒大表面蛋白(LHB)诱导的内质网应激条件下，抑癌基因p27 5′UTR内部核糖体进入位点(IRES)的活性变化及其调控机制。方法 构建双荧光素酶报告质粒，用双荧光素酶报告基因实验检测p27 5′UTR中IRES的活性；利用qRT-PCR和Western blotting检测LHB诱导的未折叠蛋白反应相关分子水平；RNA下拉、质谱技术和RNA免疫沉淀筛选并确认潜在的与p27 5′UTR结合的相关蛋白；siRNA转染建立PCBP2和ANXA2敲低细胞模型，用双荧光素酶报告基因检测在敲低PCBP2和ANXA2后p27 IRES翻译活性的变化。结果 成功构建了检测p27 IRES活性的双荧光素酶报告质粒。LHB可以诱导内质网应激，同时显著提高p27的IRES翻译活性(P<0.01)。LHB过表达激活了PERK通路并提高了eIF2α的磷酸化水平，特异性PERK通路抑制剂GSK2606414使RERK和eIF2α的磷酸化水平降低，从而引起p27 5′UTR的IRES翻译活性显著降低(P<0.01,P<0.05)。同时，磷酸酶抑制剂Sal003能显著增加eIF2α磷酸化水平，使p27 IRES活性进一步增强(P<0.01,P<0.05)。最后，我们发现PCBP2和ANXA2作为潜在的反式作用因子可增强p27 IRES活性。结论 LHB诱导的内质网应激通过eIF2α磷酸化增强p27 IRES翻译活性。反式作用因子PCBP2和ANXA2正向调控其IRES翻译活性。

关键词

乙型肝炎病毒大表面蛋白 / p27 5′UTR / 内质网应激 / 内部核糖体进入位点 / 反式作用因子

基金资助

国家自然科学基金(82130084)