肝癌阿帕替尼耐药细胞株的构建及耐药基因研究

摘要

目的 探究肝癌细胞对阿帕替尼的潜在耐药机制。方法 选取人SNU-739/SNU-878肝癌细胞系，构建阿帕替尼耐药细胞株。通过细胞活力检测和平板克隆形成实验对亲本及耐药细胞进行药敏试验，利用RNA芯片技术检测亲本及耐药细胞基因表达谱，根据表达差异筛选出介导阿帕替尼耐药的关键基因；利用qRT-PCR和Western blotting对关键基因进行验证，并通过药敏试验检测关键基因稳定过表达对细胞耐药的影响。结果 阿帕替尼耐药细胞株的细胞活力、克隆形成数显著高于亲本细胞(P<0.05);筛选出关键基因氨基甲酰磷酸合成酶1(CPS1),其mRNA及蛋白水平在耐药细胞株中显著下调(P<0.05),过表达CPS1可显著降低肝癌细胞活力及克隆形成能力(P<0.05)。结论 CPS1可能是介导肝癌细胞对阿帕替尼耐药的关键基因。

关键词

肝癌 / 阿帕替尼 / 耐药 / 氨基甲酰磷酸合成酶1