依达拉奉右莰醇通过抑制NLRP3对急性永久性局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用

摘要

目的 探索自由基清除剂依达拉奉与双环单萜类化合物右莰醇对急性缺血性脑卒中(AIS)损伤的神经保护作用及其对小胶质细胞NLRP3炎症小体的作用及机制。方法 将实验动物随机分成5组(n=10):(1)Sham组；(2)大脑中动脉闭塞(MCAO)组；(3)1.5 h组；(4)3.0 h组；(5)4.5 h组。用线栓法构建大鼠MCAO模型，使用依达拉奉右莰醇(EDB)对MCAO大鼠进行治疗，评估大鼠神经系统状况；通过TTC染色技术测量脑部梗塞区域；运用Nissl和TUNEL染色技术观察神经细胞死亡情况；借助免疫荧光技术分析CD68、Iba-1、Arg-1蛋白的表达水平，以及通过免疫印迹技术检测NLRP3、Caspase-1、C-Caspase-1、IL-1β等关键分子。结果 在梗死24 h检测发现，注射EDB可以改善MCAO大鼠脑组织的局灶性梗死体积(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.000 2;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.014 3),减轻神经细胞的损伤与凋亡(MCAO组vs 1.5 h组，P<0.000 1;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.000 3;MCAO组vs 4.5 h组，P=0.003 0),减少NLRP3炎症小体(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.006 1)及其下游蛋白Caspase-1(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.001 2;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.006 2;MCAO组vs 4.5 h组，P=0.025 6)、C-Caspase-1、IL-1β(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.037 4)的表达，减少小胶质细胞标志物Iba-1(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.000 8;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.030 3)与活化的小胶质细胞标志物CD68(MCAO组vs 1.5 h组，P<0.000 1;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.000 3;MCAO组vs 4.5 h组，P=0.000 7)的表达，减少神经炎症反应中的M1与M2(MCAO组vs 1.5 h组，P=0.000 2;MCAO组vs 3.0 h组，P=0.006 1)的表达。结论 EDB能有效阻断NLRP3,进而减缓小胶质细胞的活化过程，显著缓解神经系统的炎症状态。EDB 1.5 h注射组优于3.0 h与4.5 h注射组，但是将小胶质细胞由M1型向M2型转化在早期不明显。

关键词

脑卒中 / 依达拉奉右莰醇 / 小胶质细胞 / NLRP3炎症小体

基金资助

国家自然科学基金面上项目(82271949)