基于氧化应激的牙髓细胞衰老和动物衰老模型建立与表型分析

摘要

目的 比较和分析氧化应激诱导的牙髓细胞和动物衰老模型与自然衰老状态的不同。方法 采用CCK-8法与SA-β-半乳糖苷酶染色法确定诱导人牙髓成纤维细胞衰老的最适H₂O₂刺激浓度，利用流式细胞术、EdU染色、γ-H2AX免疫荧光染色、qRT-PCR对细胞增殖能力及衰老相关分泌表型（SASP）基因表达情况进行分析；通过D-半乳糖皮下注射构建小鼠衰老模型，检测小鼠脏器指数及衰老相关生化指标。结果 采用200μmol/L H₂O₂处理细胞1 h可导致细胞增殖能力下降、细胞周期阻滞、DNA损伤、SASP基因表达增加，与复制性传代细胞具有相同的表现（P<0.01,P<0.05）;小鼠皮下注射250 mg/（kg·d）的D-半乳糖后，出现脏器指数下降、氧化应激相关生化指标改变以及血清IL-1β、TNF-α升高（P<0.01,P<0.05）,与自然衰老小鼠表型相似。结论 H₂O₂刺激细胞衰老模型和D-半乳糖诱导小鼠衰老模型能够再现与自然衰老相似的衰老表型，为衰老的机制和防治研究提供模型工具。

关键词

细胞衰老 / 氧化应激 / 过氧化氢 / D-半乳糖 / 牙髓 / 动物模型 / 衰老相关分泌表型 / 复制性衰老