基于网络药理学探讨加减解毒汤治疗流行性乙型脑炎的分子机制

摘要

目的 探讨加减解毒汤对流行性乙型脑炎(JE)的治疗作用并运用网络药理学挖掘加减解毒汤治疗JE的活性成分和潜在作用机制。方法 SPF级6周龄C57BL/6J小鼠足底注射乙型脑炎病毒(JEV)-P3毒株构建JEV感染小鼠模型，将模型小鼠随机分为3组：对照组、模型组、模型组+加减解毒汤组。给药期间对小鼠体质量、生存率和行为学进行评价。末次给药2 h后处死小鼠，观察HE病理改变，ELISA检测脑组织中TNF-α和IL-6含量，qRT-PCR检测脑组织中JEV表达水平。随后，基于TCMSP和BATMAN-TCM数据库进行加减解毒汤化合物筛选，并基于TCMSP预测成分的作用靶标。整合GeneCards、DisGeNET和OMIM数据库资源，收集JE相关疾病靶点，借助微生信在线工具提取方剂成分与疾病的共有靶标。最终采用Cytoscape 3.8.2软件构建包含中药、活性成分及作用靶点的三维互作网络模型。使用STRING数据库及Cytoscape 3.8.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络，筛选核心靶点并构建网络图。借助Metascape对共同靶点进行GO及KEGG富集分析。结果 与对照组相比，模型组小鼠体质量下降、行为学明显，并于造模后第16日全部死亡，脑组织病毒载量和炎症因子水平显著上升，HE脑组织出现病理改变。与模型组相比，模型组+加减解毒汤组显著抑制JEV诱导的小鼠表型变化并抑制脑组织中病毒载量和炎症因子水平，脑组织病理状态也得到明显改善(P<0.05)。进一步筛选得出加减解毒汤中234个活性成分，成分靶点与疾病的共同靶点141个。核心活性成分包括靛玉红、薯蓣皂苷元、β-谷甾醇、槲皮素、千层纸素A、尼泊尔莺尾素、异牧荆素、山柰酚等。PPI网络中筛选出10个核心靶点，包括ALB、AKT、TNF、IL-6、IL-1β、TP53、PTGS2、JUN、MMP9和CASP3。GO和KEGG分析显示主要涉及JAK-STAT、TNF和IL-17等炎症信号通路。结论 加减解毒汤通过多靶点、多通路的作用机制，减轻JEV引起的炎症反应和细胞凋亡，从而治疗JE。

关键词

流行性乙型脑炎 / 中药复方 / 加减解毒汤 / 药效评价 / 网络药理学 / 活性成分 / 作用机制 / 分子对接