纳米佐剂-抗原共价偶联物中抗原负载率定量方法研究

摘要

目的 建立一种纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确定量方法。方法 以PLGA-PEG-COOH共聚物为原料，乳化溶剂挥发法合成PLGA纳米粒子（NPs）作为纳米佐剂，以牛血清白蛋白（BSA）为模型抗原，以1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为交联剂共价交联纳米佐剂与抗原以制备交联NPs。以二喹啉甲酸（BCA）法和考马斯亮蓝染色（Bradford）法为基础并进行改进，采取多种方法测定交联NPs中BSA抗原的A_{562 nm}和A_{595 nm}值，排除NPs散射作用对测定造成的干扰，分析测定结果的可靠性与稳定性，建立抗原负载率准确定量方法。结果 交联物中微量的交联剂EDC/NHS可与BCA工作液反应产生强A_{562 nm}值，从而干扰BCA法的准确定量；在Bradford法中，空白NPs与Bradford工作液作用产生的A_{595 nm}值来源可拆分如下：A_{595 nm（空白NPs+Bradford工作液）}=A_{595 nm（空白NPs+PBS缓冲液）}+A_{595 nm（PBS缓冲液+Bradford工作液）}。因此，交联NPs中抗原的A值可依据下式计算：A_{595 nm（BSA）}=A_{595 nm（交联NPs+Bradford工作液）}-A_{595 nm（交联NPs+PBS缓冲液）}-A_{595 nm （PBS缓冲液+Bradford工作液）},实现对交联物中抗原交联率的准确测定。结论 利用Bradford法按A_{595 nm}的来源将纳米佐剂-抗原交联物与Bradford工作液产生的A_{595 nm}值进行拆分可有效排除NPs散射对测定造成的干扰，实现纳米佐剂-抗原复合物中抗原负载率的准确测定。

关键词

纳米佐剂 / 共价交联 / 负载率,抗原 / 定量方法