VIM通过调控上皮-间质转化增强非小细胞肺癌顺铂耐药性

摘要

目的 基于转录组测序分析与细胞实验，筛选调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂耐药的潜在关键分子，并验证其功能。方法 通过GEO数据库转录组测序数据，筛选人NSCLC A549细胞及其顺铂耐药株A549/DDP细胞的差异表达基因(DEGs);结合KEGG和GO富集分析差异基因富集通路；将NSCLC细胞分为对照组(A549细胞)和耐药组(A549/DDP细胞),采用qRT-PCR和Western blotting实验检测关键差异基因的表达；利用瞬时干扰技术构建波形蛋白(VIM)敲低细胞系(A549/DDP-siVIM),并分析该细胞(siVIM组)与A549细胞(A549组)、A549/DDP细胞(DDP组)的耐药性差异。结果 细胞划痕实验显示，与A549细胞相比，A549/DDP细胞的体外迁移能力显著增强(P<0.01)。转录组测序分析鉴定出A549和A549/DDP细胞间存在165个DEGs; KEGG和GO富集分析显示这些DEGs显著富集于与上皮-间质转化(EMT)相关的通路，提示EMT可能参与调控顺铂耐药细胞的迁移能力。VIM是两组细胞中差异最显著的基因，qRT-PCR和Western blotting证实其在A549/DDP细胞中的表达水平显著高于A549细胞；干扰A549/DDP细胞中VIM的表达可降低间质标志物N-cadherin的水平，且GEPIA数据库分析表明，在NSCLC中VIM的表达与EMT关键诱导信号分子表达呈正相关。细胞划痕实验表明，干扰VIM可抑制A549/DDP细胞的迁移能力(P<0.01)。细胞增殖实验显示，在8 mg/L顺铂作用下，A549/DDP细胞的存活率高于A549细胞，而敲低VIM后，其细胞存活率显著降低(P<0.01)。结论 本研究成功鉴定出VIM是调控NSCLC细胞顺铂耐药的关键分子，发现其能增强耐药细胞的迁移能力并降低细胞对顺铂的敏感性，为逆转NSCLC顺铂耐药提供了新的潜在治疗靶点。

关键词

非小细胞肺癌 / 波形蛋白 / 上皮-间质转化 / 细胞迁移 / 细胞增殖 / 顺铂耐药 / 差异表达基因 / 转录组测序