葛根酵素复合物改善酒精性肝炎的作用研究

摘要

目的 在获得最佳灌胃剂量的基础上，进一步研究葛根酵素复合物对小鼠酒精性肝炎的药理作用。方法 （1）实验分组与给药：50只小鼠随机分为对照（control,Con）组、模型（model,Mod）组、葛根酵素复合物低剂量[kudzu composite low-dose,JS(L)]组、葛根酵素复合物中剂量[kudzu composite medium-dose,JS(M)]组、葛根复合物高剂量[kudzu composite high-dose,JS(H)]组，每组10只。造模的第4天开始给药：JS(L)组15 mL/（kg·d）、JS(M)组30 mL/（kg·d）、JS(H)组60 mL/（kg·d），同时给予Con组同等剂量生理盐水，连续14 d。实验结束后处死小鼠，采集肝组织和眼眶静脉丛血液。检测指标：计算肝脏指数；观察苏木精-伊红染色；Western blot检测：转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMG-CR）、甾醇调节元件结合蛋白-1C(sterol regulatory element-binding protein-1C,SREBP-1C)蛋白含量；使用试剂盒测定谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、白蛋白（albumin,ALB）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）。（2）实验分组与给药：40只小鼠随机分为Con组、葛根酵素复合物（kudzu composite,JS）组、Mod组、治疗（Mod+JS）组，每组10只，造模方法同（1）。实验结束后处死小鼠，采集肝组织和眼眶静脉丛血液。检测指标：观察HE染色；Western blot检测：环氧合酶（cyclooxygenase,COX）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2相关X蛋白（BCL-2-associated X protein,BAX）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine requining aspartate protease-3,Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cysteine requining aspartate protease-9,Caspase-9)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、TGF-β、HIF-1α、HMG-CR、SREBP-1C、磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶2(phosphorylated calcium/calmodulin-dependent protein kinase 2,P-CaMK2)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP-activated protein kinase,P-AMPK）蛋白含量；使用试剂盒测定ALT、AST、ALB、TBIL。结果 （1）与Mod组相比，JS(L)、JS(M)、JS(H)组的肝脏指数、纤维化和脂肪化呈浓度依赖性改变；HE染色结果显示，与Mod组相比，JS(L)、JS(M)、JS(H)组呈浓度依赖性改善。（2）与Mod组相比，（Mod+JS）组的肝脏指标、纤维化和脂肪化均显著改善；HE染色结果显示，与Con组相比，Mod组肝组织结构紊乱，可见大量炎性细胞浸润和脂肪空泡；与Mod组相比，（Mod+JS）组情况明显改善；Western blot结果显示，与Mod组相比，（Mod+JS）组可有效降低酒精性肝炎小鼠肝脏的IL-1、IL-6、TNF-α炎症因子表达水平，提高COX、CAT抗氧化水平，降低Caspase-9、Caspase-3、TGF-β凋亡因子表达水平；进一步检测发现，与Mod组相比，（Mod+JS）组的P-AMPK与P-CaMK2表达量显著增加。结论 葛根酵素复合物可通过调节酒精性肝炎小鼠肝脏的氧化应激、炎症因子和凋亡因子的表达，从而改善酒精性肝炎。

关键词

葛根酵素复合物 / 酒精性肝炎 / 氧化应激 / 细胞凋亡 / 炎症因子