miR-199a-5p通过靶向TGF-β2参与调节肝纤维化进程

郭晖; 李竟; 张英杰; 曹通; 耿建

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2024.01.002

蚌埠医科大学学报 ›› 2024, Vol. 49 ›› Issue (01) : 7 -12. DOI: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2024.01.002

miR-199a-5p通过靶向TGF-β2参与调节肝纤维化进程

郭晖, 李竟, 张英杰, 曹通, 耿建

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摘要

目的：探讨miR-199a-5p在肝硬化发生中的作用机制。方法：通过设计合成miR-199a-5p mimics和miR-199a-5p inhibitor序列，对miR-199a-5p进行过表达和抑制研究，利用CCK8、5EdU、Western blotting等方法检测过表达miR-199a-5p对Lx-2细胞增殖活性的影响。以Lx-2细胞cDNA为模板，分别利用TGF-β2 3′UTR的野生型引物序列与miR-199a-5p潜在结合位点突变引物序列进行PCR扩增，获得野生型TGF-β2 3′UTR序列和突变型TGF-β2 3′UTR序列，并通过双荧光报告基因实验揭示TGF-β表达的调控过程。结果：体外实验结果显示，Lx-2细胞转染miR-199a-5p mimics后8、12、24 h,细胞活性均较对照组增加(P<0.05～P<0.01),α-SMA蛋白表达水平较对照组提高(P<0.05);Lx-2细胞转染miR-199a-5p inhibitor后8、12、24 h,细胞活性均较对照组降低(P<0.05～P<0.01),α-SMA表达水平亦较对照组下降(P<0.05)。双荧光素酶试验显示，与对照组相比，转染miR-199a-5p mimics后，包含野生型TGF-β2 3′UTR序列(WT)的荧光素酶质粒表达明显降低(P<0.01),而包含miR-199a-5p结合位点突变序列(MUT)的荧光素酶质粒表达无明显变化(P>0.05)。结论：上调miR-199a-5p表达可促进Lx-2细胞系增殖，同时，miR-199a过表达可促进细胞基质蛋白α-SMA表达，激活Lx-2向纤维化方向发展。miR-199a-5p在肝硬化进程中起促进肝纤维化和肝硬化作用，TGF-β2作为肝纤维化的主要调控因子之一，miR-199a-5p通过调控下游TGF-β2的表达，实现对肝纤维化和肝硬化的促进作用。