过表达vWF对人脐静脉内皮细胞生物学影响的实验研究

摘要

目的：探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法：设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体，将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞，Western blotting检测各组细胞vWF的表达效果，选取优势组。通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞凋亡实验、细胞成管实验等，观察过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。Western blotting检测5个常见通路蛋白因子在2组细胞中的表达，探测可能相关的机制。结果：成功转染后各组HUVECs的vWF蛋白表达水平均明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中vWF-OE4组过表达量最高，故选取该引物序列进行后续实验。与对照组相比，vWF-OE组细胞增殖减慢，细胞划痕48 h迁移率降低、Transwell细胞侵袭率降低(P<0.05),细胞凋亡率、血管形成能力、HUVECs生成小管的长度均增高(P<0.05),JUN、P53蛋白含量均增高(P<0.05)。结论：过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭行为具有显著抑制作用，促进凋亡，成管能力增强。

关键词

布加综合征 / 血管血友病因子 / 人脐静脉内皮细胞