泛素化连接酶c-Cbl对急性髓系白血病细胞增殖分化能力的影响

摘要

目的：探讨泛素化连接酶c-Cbl对急性髓系白血病细胞株THP-1细胞(人急性单核细胞白血病细胞)增殖分化能力的影响。方法：构建并筛选出稳定转染HBLV-h-CBL-ZsGreen-PURO敲低和HBLV-h-CBL-HA-BSD过表达病毒载体的THP-1细胞，分为4组：NC组(c-Cbl敲低组对照)、 S3组(c-Cbl敲低组)、 EV组(c-Cbl过表达组对照)、c-Cbl组(c-Cbl过表达组)。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)和细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒检测稳转细胞的增殖和凋亡。采用蛋白免疫印迹技术检测基因敲低或过表达细胞的凋亡相关蛋白(Bcl-2、caspase-9、cleaved-caspase-9)的表达情况。采用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、瑞氏吉姆萨染色、流式细胞术检测表面分化抗原CD11b表达差异。采用蛋白免疫印迹技术检测PU.1蛋白表达情况来研究稳转细胞的分化能力。结果：转染慢病毒后，与NC组相比，S3组中c-Cbl基因的蛋白表达水平下降；与EV组相比，c-Cbl组中c-Cbl基因的蛋白表达水平上升。CCK8和流式细胞术结果表明c-Cbl能够促进THP-1的增殖(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果表明c-Cbl能够抑制凋亡蛋白的表达，并且促进Bcl-2蛋白表达。NBT还原实验结果表明c-Cbl敲除后NBT阳性细胞增多，c-Cbl过表达后阳性细胞减少(P<0.01)。瑞氏吉姆萨染色结果显示，c-Cbl敲低后细胞核分化成肾型、蚕豆型。流式细胞术结果表明c-Cbl敲除后CD11b表达增多，过表达后CD11b表达减少。蛋白免疫印迹结果也显示c-Cbl敲除后PU.1蛋白表达增多，过表达后减少。结论：c-Cbl能够促进THP-1细胞的增殖，抑制其凋亡和分化。

关键词

髓系白血病 / 细胞株 / c-Cbl / 增殖 / 凋亡 / 分化