等温快速检测HAdV-11/55型方法的建立与评价

doi:10.13898/j.cnki.issn.2097-5252.2025.02.021

蚌埠医科大学学报 ›› 2025, Vol. 50 ›› Issue (02) : 234 -238. DOI: 10.13898/j.cnki.issn.2097-5252.2025.02.021

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摘要

目的：将重组酶介导等温扩增技术(RAA)和实时荧光探针相结合拟开发一种简易、快速的人腺病毒(HAdV)-11/55检测方法。方法：以HAdV-11/55的Hexon基因作为靶序列设计合成多对引物和探针，选择最佳引物探针组合，在39℃、40℃、42℃条件下进行重组酶介导等温扩增，选出最佳反应温度，并评估该方法的灵敏度和特异性。结果：实验表明该方法的最适温度为42℃,最低检测限为10～1 copies/μL。特异性检测结果显示，该实时荧光RAA检测方法可以检测HAdV-11/55,且不与其他亚型和其他呼吸道病原体发生交叉反应，特异性良好，该方法所得结果与实时荧光PCR检测结果一致性为100%,具有良好的检测性能。结论：本研究开发的实时荧光RAA检测方法可以在仅有简单恒温设备的条件下20 min内完成检测，是一种检测HAdV-11/55快速且简易的方法，适用于HAdV-11/55的床旁分子诊断检测。