小鼠血管内皮细胞的原代培养及衰老模型的建立

摘要

目的：建立一套简便且高效的小鼠主动脉内皮细胞原代提取及培养技术，并诱导细胞衰老模型。方法：无菌条件下获取8周龄C57BL/6小鼠胸腹主动脉，采用胶原酶法消化组织，收集内皮细胞并进行培养。用倒置显微镜持续监测细胞的生长状况，通过流式细胞术鉴定与分析内皮细胞的特异性标志物CD31和CD105的表达水平。用200μmol/L H₂O₂刺激内皮细胞24 h后，进行Western blotting、qRT-PCR检测细胞衰老标志物p53、p21的表达水平以及SA-β-Gal染色等实验。结果：在细胞培养初期，可在倒置显微镜下观察到散在的、呈不规则梭形的贴壁生长状态，逐渐发生分裂增殖并延伸连接形成网状；初始传代后，细胞逐渐展现出内皮细胞特有的“铺路石”状结构。流式细胞术检测有95.8%的细胞同时表达CD31和CD105。SA-β-Gal染色实验结果证明，与对照组相比，H₂O₂处理组的阳性细胞比例增高（P<0.01）,Western blotting和qRT-PCR实验结果证明，与对照组比较，H₂O₂处理组的p53、p21的表达水平皆有升高，差异均有统计学意义（P<0.05～P<0.01）。结论：成功建立操作简便的小鼠主动脉血管内皮细胞原代培养体系，并成功构建应激诱导细胞衰老模型，为内皮细胞体外实验研究提供了可靠的技术支持。

关键词

血管内皮细胞 / 原代培养 / 流式细胞术 / 细胞衰老