miR-221-3p/GPRC5A和恩格列净对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖、自噬、凋亡的影响及机制

摘要

目的：观察恩格列净（EMPA）对高糖（HG）诱导肾小球系膜细胞增殖、自噬、凋亡的影响，并探究其作用机制。方法：分别采用5 mmol/L、25 mmol/L的葡萄糖处理人肾小球系膜细胞构建正常组（NG）、HG组；将HG诱导的肾小球系膜细胞随机分为HG+EMPA组（500 nmol/L的EMPA处理）、HG+二甲基亚砜（DMSO）组（等量的DMSO处理）、HG+anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、HG+anti-miR-221-3p组（转染anti-miR-221-3p）、HG+EMPA+miR-con组（转染miR-con联合500 nmol/L的EMPA）、HG+EMPA+miR-221-3p组（转染miR-221-3p联合500 nmol/L的EMPA），需要转染的细胞使用脂质体法将其转染至肾小球系膜细胞。细胞计数试剂盒（CCK8）法检测细胞增殖率；蛋白免疫印迹（Western blotting）实验检测多功能接头蛋白（p62）和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（LC3-Ⅱ）/LC3-Ⅰ、 G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)的蛋白表达；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙锭（ANNEXIN V-FITC/PI）法检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果：与NG组相比，HG组细胞的增殖率、LC3-Ⅱ/Ⅰ值显著降低，p62蛋白、凋亡率、miR-221-3p表达显著升高（P<0.05）；与HG+DMSO组相比，HG+EMPA组细胞增殖率、LC3-Ⅱ/Ⅰ值显著升高，p62蛋白、凋亡率、miR-221-3p表达显著降低（P<0.05）。与HG+anti-miR-NC组相比，HG+anti-miR-221-3p组肾小球系膜细胞的增殖率、LC3-Ⅱ/Ⅰ值显著升高，p62蛋白表达、凋亡率显著降低（P<0.05）。与HG+EMPA+miR-con组相比，HG+EMPA+miR-221-3p组肾小球系膜细胞的增殖率、LC3-Ⅱ/Ⅰ值明显升高，p62蛋白表达、细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;miR-221-3p与GPRC5A存在靶点关系。结论：EMPA可抑制HG诱导的肾小球系膜细胞增殖、自噬，促进细胞凋亡，其机制可能与调控miR-221-3p/GPRC5A信号通路有关。

关键词

糖尿病肾病 / 恩格列净 / miR-221-3p / G蛋白偶联受体C家族5A / 增殖 / 自噬 / 凋亡

基金资助

河北省医学科学研究课题计划(20200430)